人熱休克蛋白90(HSP-90)免疫組化試劑盒,組織塊取材不能太大過厚,才能較好地完成脫水的過程。如果取材太厚,在較短的時(shí)間內(nèi)脫水不*,將可引起一系列的問題,比如浸蠟不*,切片不好完成,切不完整。由于先天不足,導(dǎo)致后來切片染色的脫落,造成染色的失敗,或者由此反復(fù)操作,造成人力物力的浪費(fèi),造成病理報(bào)告的延期發(fā)出等。因此,對取材的要求是除了要求要有藝術(shù)性外,即平整、外觀好看,還要求適中。
規(guī)格:50T/100T
存儲:-20℃
運(yùn)輸:干冰+冰袋運(yùn)輸
人熱休克蛋白90(HSP-90)免疫組化試劑盒,應(yīng)用于免疫組織化學(xué)染色的切片,對切片的質(zhì)量要求較高,切片必須完整,平展、無汽泡,無鄒折,這樣有利在染色時(shí)的沖洗,有利于切片的牢固附貼。如果切片不平展,免疫組化染色后,可出現(xiàn)染色不均勻的現(xiàn)象,顏色深淺不一, 不平。如果切片有汽泡切片在烘烤時(shí),由于汽泡的破裂影響了汽泡周圍的組織,在其周圍可觀察到深淺不一的染色。如果切片有鄒折,免疫組化染色后,在鄒折的地方有深淺不一的顏色,這是一種假陽性,容易引走混淆。應(yīng)用于免疫組化染色的切片。由于整個(gè)過程需經(jīng)幾個(gè)階段的處理,如抗原修復(fù)時(shí)抗原修復(fù)液的沸騰且需持續(xù)十幾分鐘,PBS的反復(fù)沖洗,有的甚至于4℃冰箱中孵育達(dá)十幾小時(shí)。因此,對切片的質(zhì)量要求很高,尤其是切片的附貼程度。以往有人主張切片在60℃以下烘烤30-60分鐘即可按此進(jìn)行結(jié)果是切片掉片嚴(yán)重,切片松動率占*。切片究竟烘烤多長時(shí)間才合適,既不脫片和適合各項(xiàng)要求,又不至于破壞抗原。幾組實(shí)驗(yàn)[]診斷P173認(rèn)為,切片在60℃的恒溫干燥箱中烘烤2-5小時(shí)zui為合適。這是因?yàn)椋嚎乖赡褪苋绱说臏囟?,病理科一般使用的石蠟,其熔點(diǎn)在60℃左右,組織浸蠟時(shí),浸蠟箱中的溫度,一般都調(diào)在65℃左右,組織在這樣溫度中要浸泡2小時(shí)以上,才能達(dá)到*地浸蠟。組織中的抗原已經(jīng)受了65℃的溫度考驗(yàn),保存下來的抗原,都已具有耐熱性。另外,經(jīng)上述時(shí)間烘烤出來的切片,附貼牢固,抗原保存好,染色成功率達(dá)*,保證了病理診斷的及時(shí)性和準(zhǔn)確性。
特需要注意的是,不管是應(yīng)用于診斷的切片還是研究用的切片,烘烤后應(yīng)盡快進(jìn)行染色。如果切片切完后,遲遲不進(jìn)行染色,存放于室溫中或工作冰箱中,切片中的抗原將會隨著時(shí)間的延長而逐漸消失,甚至出現(xiàn)假陰性。原則上是新鮮切片,即行染色,染多少張切多少張,這樣才能盡可能的保存表達(dá)更多的抗原。
人熱休克蛋白90(HSP-90)免疫組化試劑盒,PBS的沖洗:
免疫組化的染色過程,除了前面的處理和加入的抗體外,都在PBS的沖沖洗洗中度過,PBS沖洗的正確與否,也是導(dǎo)致zui后結(jié)果的關(guān)鍵。
1.單獨(dú)沖洗,防止交叉反應(yīng)造成污染。
臨床上每天檢測的病例很多,所用的抗體種類及項(xiàng)目也多,如果在加入一抗孵育完后,將它們在一個(gè)缸內(nèi)洗,這樣就會造成交叉污染,影響zui后的結(jié)果。正確的做法是單獨(dú)地進(jìn)行沖洗,沖洗的PBS為一次性,保證切片沒有相互交叉污染的機(jī)會。
2.溫柔沖洗,防止切片的脫落。
沖洗切片,取出切片,將PBS從上輕輕地沖洗,讓PBS自上而下流下來,不要拿起切片將PBS對準(zhǔn)切片沖洗,這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力,很容易使切片周邊引起松動,導(dǎo)致切片的脫落。
3.沖洗的時(shí)間要足夠,才能*洗去結(jié)合的物質(zhì)。
沖洗切片有人提出用微振蕩器振染,振下未結(jié)合的各種物,使之不產(chǎn)生背景,此種做法一是浪費(fèi)時(shí)間,二是很容易導(dǎo)致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實(shí)踐認(rèn)為,用一小燒杯柔和地于切片上沖洗,就能*沖洗去未結(jié)合的物質(zhì),無需附加其它條件,沖洗好于切片上再注入PBS,持續(xù)2分鐘左右就*足夠了。
4.PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。
劉彥仿指出:中性及弱鹼性條件(PH7-8)有利于免疫復(fù)合物的形成,而酸性條件則有利于分解;低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成,而高離子強(qiáng)度則有利于分解。免疫組化P56我們目前常用的PBS的PH在7.4-7.6濃度是0.01M,根據(jù)本室十幾年來的使用情況,認(rèn)為該溶液價(jià)格便宜配制方面,使用效果好。
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