原位雜交(FISH三標(biāo))
服務(wù)介紹:
原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。實(shí)驗采用三種標(biāo)記不同熒光素的不同探針,同時檢測一個樣本。適用于各類細(xì)菌檢測和其他基因檢測。
名稱 | 規(guī)格 |
原位雜交(FISH三標(biāo)) | 張 |
實(shí)驗流程:
1、污泥切片固定:切片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min,于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
2、消化:基因筆畫圈,滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.
3、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。
4、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針1,探針2,探針3雜交液,37度雜交過夜。
5、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌
6、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
7、熒光全景掃描。
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運(yùn)輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗,固定時間過長影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運(yùn)輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運(yùn)輸;
4、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無酶PBS,密封,4℃運(yùn)輸。
單據(jù)填寫:
1、探針合成:需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標(biāo)記類型;
2、自帶探針需告知完整探針信息;
3、寫明檢測要求。