293E細(xì)胞,E轉(zhuǎn)化人胚腎293細(xì)胞細(xì)胞特性：
1、細(xì)胞活力
原代取材活力≥90
產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60
培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹突，培養(yǎng)時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)13-16天。
2、細(xì)胞純度
80以上細(xì)胞神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物為陽性
質(zhì)量控制：本產(chǎn)品經(jīng)過了細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體檢測(cè)。
運(yùn)輸保存：采用干冰保存運(yùn)輸
用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療 
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁生長(zhǎng),在軟瓊脂中成簇生長(zhǎng)，并可懸浮生長(zhǎng)
細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
293E細(xì)胞,E轉(zhuǎn)化人胚腎293細(xì)胞關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)溫馨小貼士：
細(xì)胞的凍存方法
1．細(xì)胞：選對(duì)數(shù)生*細(xì)胞，收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2．計(jì)數(shù)：按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。
3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5．封口：用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細(xì)檢查，定要封嚴(yán)，必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：細(xì)胞名稱，凍存日期，以便日后查找。
細(xì)胞復(fù)蘇的方法
1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
污染的預(yù)防和清除
一、污染的預(yù)防
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
（一）從操作者做起
1、操作者責(zé)任心要強(qiáng)，要細(xì)心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿*。進(jìn)入后關(guān)好門，坐下來盡量少走動(dòng)。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大批污染。
2、操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
3、操作時(shí)要常更換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾，保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。
（二）從物品、用品消毒滅菌著手細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
（三）防止細(xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作，避免一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。所有細(xì)胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇，重新培養(yǎng)。
二、污染的清除
培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；有細(xì)胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。
（一）使用抗生素
抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（*100u/mL加*100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除*、*外，還可用*、*、多粘菌素、四環(huán)素、*等。常用400～800μg/mL*或200μg/mL四環(huán)素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進(jìn)行治療。近年來有報(bào)道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對(duì)殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液，-20℃保存?zhèn)溆?，使用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用時(shí)先吸除污染的培養(yǎng)液，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液，3天后再吸除培養(yǎng)液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)4天，如此連續(xù)3個(gè)輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。
（二）使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價(jià)1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。
（三）加溫處理
將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，摸索能zui大限度殺死支原體又對(duì)細(xì)胞影響zui小的加熱時(shí)間。此法有時(shí)不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。
（四）其他方法
除了上述去除污染的方法外，還有動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴*再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價(jià)值，一般均棄之重新培養(yǎng)。
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