293 Cells low passage 細(xì)胞,人胚腎細(xì)胞細(xì)胞特性:
1、細(xì)胞活力
原代取材活力≥90
產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60
培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹突,培養(yǎng)時(shí)間可長達(dá)13-16天。
2、細(xì)胞純度
80以上細(xì)胞神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物為陽性
質(zhì)量控制:本產(chǎn)品經(jīng)過了細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測(cè)。
運(yùn)輸保存:采用干冰保存運(yùn)輸
用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
細(xì)胞生長:貼壁生長,在軟瓊脂中成簇生長,并可懸浮生長
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
293 Cells low passage 細(xì)胞,人胚腎細(xì)胞關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)溫馨小貼士:
細(xì)胞的凍存方法
1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生*細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
細(xì)胞復(fù)蘇的方法
1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。
3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺(tái)上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。
4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
污染的預(yù)防和清除
一、污染的預(yù)防
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前,才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手:
(一)從操作者做起
1、操作者責(zé)任心要強(qiáng),要細(xì)心穩(wěn)重,操作技術(shù)要熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,按規(guī)定穿*。進(jìn)入后關(guān)好門,坐下來盡量少走動(dòng)。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大批污染。
2、操作者動(dòng)作要輕,必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話,若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
3、操作時(shí)要常更換吸管,切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾,保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊,zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。
(二)從物品、用品消毒滅菌著手細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
(三)防止細(xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作,避免一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。所有細(xì)胞一旦購置,或從別處引入,或自己建立,均應(yīng)及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,重新培養(yǎng)。
二、污染的清除
培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大,宜棄之;有細(xì)胞株留存的或可購置的,可在尋找原因后*消毒操作室,復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞,再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除。
(一)使用抗生素
抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素(*100u/mL加*100μg/mL),污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時(shí),再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除*、*外,還可用*、*、多粘菌素、四環(huán)素、*等。常用400~800μg/mL*或200μg/mL四環(huán)素處理,每隔2~3日換液1次,傳1~2代進(jìn)行治療。近年來有報(bào)道,4-氟,2-羥基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物(BM-2)等三種抗生素單用或合用對(duì)殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液,-20℃保存?zhèn)溆?,使用濃度Cip為10μg/mL,BM-1為10μg/mL,BM-2為5μg/mL。使用時(shí)先吸除污染的培養(yǎng)液,加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液,3天后再吸除培養(yǎng)液,加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液,培養(yǎng)4天,如此連續(xù)3個(gè)輪次,直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后,再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。
(二)使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價(jià)1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。
(三)加溫處理
將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí),可殺死支原體,但對(duì)細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),摸索能zui大限度殺死支原體又對(duì)細(xì)胞影響zui小的加熱時(shí)間。此法有時(shí)不可靠。若先用藥物處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。
(四)其他方法
除了上述去除污染的方法外,還有動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴*再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價(jià)值,一般均棄之重新培養(yǎng)。
公司更多細(xì)胞供應(yīng),相關(guān)產(chǎn)品:
CHL 細(xì)胞價(jià)格 倉鼠肺細(xì)胞
Chang liver 細(xì)胞價(jià)格 人張氏肝細(xì)胞
CGM1 細(xì)胞價(jià)格 人EB 病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
CFPAC-1 細(xì)胞價(jià)格 人胰腺癌細(xì)胞
CCRF-CEM [CCRF CEM]細(xì)胞價(jià)格 人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞
CCD-1095Sk 細(xì)胞價(jià)格 人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
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Calu-6細(xì)胞價(jià)格 人退行性癌細(xì)胞
Calu-3細(xì)胞價(jià)格 人肺腺癌 (胸水)
Caki-1 細(xì)胞價(jià)格 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Caco-2 細(xì)胞價(jià)格 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
Ca Ski 細(xì)胞價(jià)格 人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞
C6 細(xì)胞價(jià)格 大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C3H10T12Clone 8細(xì)胞價(jià)格 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
C127 細(xì)胞價(jià)格 小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞
BxPC-3 細(xì)胞價(jià)格 人原位胰腺腺癌細(xì)胞
BT-549 細(xì)胞價(jià)格 人乳腺管癌細(xì)胞
BT-474[BT474]細(xì)胞價(jià)格 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
BRL 3A 細(xì)胞價(jià)格 大鼠肝細(xì)胞
BRL 細(xì)胞價(jià)格 大鼠肝細(xì)胞
BNL CL.2細(xì)胞價(jià)格 小鼠胚胎肝細(xì)胞
BHK-21 [C-13] 細(xì)胞價(jià)格 倉鼠幼倉鼠腎細(xì)胞
BGC-823 細(xì)胞價(jià)格 人胃腺癌細(xì)胞(低分化)
BEL-7405 細(xì)胞價(jià)格 人肝癌細(xì)胞
BEL-7404 細(xì)胞價(jià)格 人肝癌細(xì)胞
BEL-7402 細(xì)胞價(jià)格 人肝癌細(xì)胞
Bcap-37 細(xì)胞價(jià)格 人乳腺癌細(xì)胞
BALB3T3 clone A31 細(xì)胞價(jià)格 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
B95-8 細(xì)胞價(jià)格 絨猴EBV 轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞