重要提示: Anti-PTCHD2抗體,多通道膜蛋白PTCHD2抗體價(jià)格,本產(chǎn)品僅供研究使用,不用于人類治療或診斷.
詳細(xì)信息如下:
【濃 度】:1mg/1ml
【抗體來(lái)源】:Rabbit or Mouse or Goat(咨詢或)
【克隆類型】:polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】:一抗
【性 狀】:Lyophilized or Liquid
【亞 型】:IgG
【純化方法】:affinity purified by Protein A
【儲(chǔ) 存 液】:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【保存條件】: Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
【應(yīng)用領(lǐng)域】: Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等,具體適用的實(shí)驗(yàn)請(qǐng),本公司有同一產(chǎn)品適用于不同實(shí)驗(yàn)的抗體。
Anti-PTCHD2抗體,多通道膜蛋白PTCHD2抗體價(jià)格應(yīng)用于WB實(shí)驗(yàn)時(shí)的操作方法:蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中,于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清,加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌,然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解過(guò)程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min,取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測(cè)蛋白濃度
SDS-PAGE電泳
1、 玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊,然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。
2、按前面方法配10%分離膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí),可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出,待膠面升到綠帶中間線高度時(shí)即可。然后膠上加一層水,液封后的膠凝的更快。(灌膠時(shí)開(kāi)始可快一些,膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)膠一定要沿玻璃板流下,這樣膠中才不會(huì)有氣泡。加水液封時(shí)要慢,否則膠會(huì)被沖變型。)
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時(shí),說(shuō)明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4%的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠,將其放入電泳槽中。
6、 測(cè)完蛋白含量后,計(jì)算含20-50 μg蛋白(根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇,沒(méi)有固定的量)的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開(kāi)始準(zhǔn)備上樣。(電泳液至少要漫過(guò)內(nèi)測(cè)的小玻璃板。)用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品,將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品(包括一孔做可視的蛋白marker)。(加樣太快可使樣品沖出加樣孔,若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個(gè)樣品時(shí),進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次,以免交叉污染)
8、電泳:濃縮膠時(shí)用80-100 V跑,到分離膠以后用150-200 V跑,總時(shí)間2 h左右,電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳,進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜
1、 轉(zhuǎn)一張膜需準(zhǔn)備6張7.0~8.3 cm的濾紙和1張7.3~8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時(shí)一定要戴手套,因?yàn)槭稚系牡鞍讜?huì)污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤里放入轉(zhuǎn)膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過(guò)的膜。 將夾子打開(kāi)使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊,用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開(kāi)后剝膠,除去小玻璃板后,將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上,用手調(diào)整使其與濾紙對(duì)齊,輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上,要蓋滿整個(gè)膠(膜蓋下后不可再移動(dòng))并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個(gè)海綿墊,合起夾子。整個(gè)操作在轉(zhuǎn)移液中進(jìn)行,要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸,接觸后會(huì)發(fā)生短路。
4、將夾子放入轉(zhuǎn)移槽槽中,使夾的黑面對(duì)槽的黑面,夾的白面對(duì)槽的紅面。電轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)產(chǎn)熱,在槽的一邊放一塊冰來(lái)降溫。一般用60 V轉(zhuǎn)移2 h或40 V轉(zhuǎn)移3 h。
免疫反應(yīng)
1、將膜用TBS從下向上浸濕后,移至含有封閉液的平皿中,室溫下脫色搖床上搖動(dòng)封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當(dāng)濃度(在1.5 ml離心管中);將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中,4℃孵育過(guò)夜,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min。
3、同上方法準(zhǔn)備二抗稀釋液并與膜接觸,室溫下孵育1~2 h后,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min,進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光,顯影,定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合;1 min后,將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸;1 min后,將膜移至另一保鮮膜上,去盡殘液,包好,放入X-光片夾中,曝光相應(yīng)時(shí)間。沖洗膠片。
Anti-PTCHD2抗體,多通道膜蛋白PTCHD2抗體價(jià)格現(xiàn)貨供應(yīng),公司其它相關(guān)產(chǎn)品介紹:
ANti-V5 tag抗體*??V5 tag標(biāo)簽抗體
Anti-T7 tag抗體*??T7 tag標(biāo)簽抗體
Anti-PENK/Enkephalin A抗體*腦啡肽抗體
Anti-AD7C-NTP/NTP/AF抗體*神經(jīng)絲蛋白抗體(人)
Anti-TNFAIP1抗體*?腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體
Anti-TEM 1/CD248抗體*??內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗體
Anti-E.coli/EPEC抗體*抗普通大腸埃希菌菌體蛋白抗體
Anti-MMP-9抗體*??基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體
Anti-ER-α抗體*??雌激素受體α抗體
Anti-AT1R/AGTR1抗體*血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體
Anti-SLC4A4抗體**協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4抗體
Anti-Integrin alpha 1?抗體*?整合素α1抗體
Anti-Integrin β5?抗體*?整合素β5抗體
Anti-Integrin α3/CD49c抗體*?整合素α3抗體
Anti-GSK-3α 抗體*葡萄糖合成激酶-3α抗體
Anti-P53(wt-p53)抗體*腫瘤抑制基因抗體(野生型P53)
Anti-sVEGFR2/sFLK-1抗體*??可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體
本公司*供應(yīng)免疫組化抗體、WB抗體、免疫組化試劑盒和抗體試驗(yàn)所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實(shí)驗(yàn)抗體,訂購(gòu)優(yōu)質(zhì):