人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒
產品范圍:
骨代謝,肝纖維化,腫瘤,激素內分泌、自身抗體科研ELISA檢測試劑盒
提供實驗免費代測服務(詳情請!
人,小鼠,大鼠,豬,兔,其它動物細胞因子;細胞凋亡,活性多肽、自身抗體 ,血栓與止血,
可檢測樣本:血液標本,組織液標本,尿液標本,糞便標本,腦脊液標本,胸腹水標本等(具體詳細情況請)
請嚴格參照說明書操作!
粘附分子實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人細胞間粘附分子1(ICAM-1)水平。用純化的人細胞間粘附分子1(ICAM-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細胞間粘附分子1(ICAM-1),再與HRP標記的細胞間粘附分子1(ICAM-1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞間粘附分子1(ICAM-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人細胞間粘附分子1(ICAM-1)濃度。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,*使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人細胞間粘附分子1(ICAM-1)水平。用純化的人細胞間粘附分子1(ICAM-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細胞間粘附分子1(ICAM-1),再與HRP標記的細胞間粘附分子1(ICAM-1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞間粘附分子1(ICAM-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人細胞間粘附分子1(ICAM-1)濃度。
人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒
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