貨號(hào):WT-E5598【人總?cè)舛緣A(TC)ELISA試劑盒操作步驟方法】ELISA試劑盒基本原理
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體, 這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性, 又保留酶的活性。 在測(cè)定時(shí), 把受檢標(biāo)本 (測(cè)定其中的抗體或抗原) 和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。 用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi), zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。 加入酶反應(yīng)的底物后, 底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物, 產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān), 故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。 由于酶的催化頻率很高,故可*地地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
【人總?cè)舛緣A(TC)ELISA試劑盒操作步驟方法】
方法類(lèi)型和操作步驟
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,②酶標(biāo)記的抗原或抗體,③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。
【人總?cè)舛緣A(TC)ELISA試劑盒操作步驟方法】
(一)雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法, 操作步驟如下:
(1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
(2)加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。 洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
(3)加酶標(biāo)抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
(4) 加底物: 夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。 根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。根據(jù)同樣原理, 將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物, 即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。【人總?cè)舛緣A(TC)ELISA試劑盒操作步驟方法】
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