多酚氧化酶(PPO)(檢測服務(wù))
服務(wù)介紹:
多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物,在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法,于分光光度計(jì)420nm處檢測吸光度,以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算,主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性,尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性。
背景介紹:
多酚氧化酶(PPO)是一種普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質(zhì)體中的酶,甚至在土壤中腐爛的植物殘?jiān)弦部梢詸z測到其活性。它又稱兒茶酚氧化酶、酪-氨酸酶、苯-酚酶、甲酚酶、鄰苯二酚氧化還原酶,是六大類酶中的大類氧化還原酶。PPO主要是一類含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化。
操作步驟(僅供參考):
1、 準(zhǔn)備樣品:
①植物樣品:取3g植物組織或水果中層果肉加入6ml預(yù)冷的PPO Lysis Buffer研磨或勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,留取上清液。
②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以用于該試劑盒的測定
③細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液,如有必要用PPO Lysis Buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,取上清液,-20℃凍存,用于多酚氧化酶的檢測。
④高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶,可以使用PPO Lysis Buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、 PPO加樣:按照下表設(shè)置對照管、測定管,注意:對照管、測定管中樣品為同一待測樣品,但對照管中為提前加熱煮沸5min的樣品;溶液應(yīng)按照順序依次加入,
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
待測樣品 | 0.2(提前煮沸5min) | 0.2 |
PPO Lysis Buffer | 1.4 | 1.4 |
PPO Assay Buffer | 0.4 | 0.4 |
3、 PPO檢測:以對照管為對照(調(diào)零),比色杯光徑1.0cm,立即分光光度計(jì)測定420nm處測定管的吸光度(記為A測定0);1min后立即測定420nm處測定管的吸光度(記為A測定1)。建議加入PPO Assay buffer后立即檢測,加樣時(shí)間越短越好,其反應(yīng)基本在1~2min內(nèi),其后反應(yīng)趨于平緩。
注意:該反應(yīng)系統(tǒng)是利用速率變化,求得相應(yīng)OD的變化,因此加入PPO Assay buffer立即計(jì)時(shí)很重要,每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則有可能由于操作時(shí)間有差異進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果偏差。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
全自動(dòng)生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果,結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。
送樣須知:
1.南京和上海地區(qū)的客戶可提供上門取樣服務(wù),提前一天聯(lián)系
2.外地客戶可郵寄樣本,樣本運(yùn)輸應(yīng)符合一般的生物學(xué)要求,密封加冰袋或者干冰運(yùn)輸
3.若細(xì)胞、血清、組織樣本具有潛在的傳染性或致病性,請務(wù)必提前告知
4.測試結(jié)束提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告后,樣本可以保留1個(gè)月,若需保留樣本或者回收樣本請?zhí)崆案嬷?/span>
備注:本公司對客戶的項(xiàng)目的專有技術(shù)和資料(包括實(shí)驗(yàn)方案,測試結(jié)果,樣本等)負(fù)有保密的責(zé)任。
僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其他用途!
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