細胞名稱:RAMOS 人B淋巴細胞瘤細胞
培養(yǎng)條件:RPMI-1640+10% FBS
形 態(tài):懸??;淋巴母細胞
背 景:該細胞來源于一位3歲的白人Burkitt淋巴瘤患者;EBV陰性;表達IL-4受體和低親和性IgE受體(CD23);每個細胞表面大約有1500個IL-4的結(jié)合位點;分泌IgM(lamda L);表達膜型和分泌型的免疫球蛋白
RAMOS(人B淋巴細胞瘤細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數(shù)/100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進行各種試驗。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活RAMOS(人B淋巴細胞瘤細胞)數(shù)目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。
1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個接種到96孔板,每孔體積200ul.
2.RAMOS(人B淋巴細胞瘤細胞)培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間)。
3.呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4.比色:選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制RAMOS(人B淋巴細胞瘤細胞)生長曲線。
KP-N-NS人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤細胞(腦轉(zhuǎn)移)
KU812人外周血嗜堿性白血病細胞
KURAMOCHI人卵巢癌細胞
kyse-140人食管癌細胞
Kyse450人食管癌細胞
KYSE-510人食管癌細胞
L78人肺腺鱗癌細胞
LAX人肺腺癌
LECPα-1人肺癌細胞
Li-7人肝癌細胞
lncap人前列腺癌細胞
LNCaP clone FGC人前列腺癌細胞
LoVo人結(jié)腸癌細胞