實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：流感病毒N2亞型PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99107
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)elisa試劑盒英文名稱：iNOS ELISA Kit磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體規(guī)格：25g

游離脂肪酸(FFA)elisa試劑盒英文名稱：FFA ELISA Kit?；摎涿搁L鏈抗體規(guī)格：5g

游離三碘狀腺原氨酸(Free-T3)elisa試劑盒英文名稱：Free-T3 ELISA Kit分裂周期蛋白5抗體規(guī)格：1g

游離狀腺素(FT4)elisa試劑盒英文名稱：FT4 ELISA Kitβ淀粉樣肽/Aβ42抗體規(guī)格：5g

游離睪酮(F-TESTO)elisa試劑盒英文名稱：F-TESTO ELISA KitADCK4蛋白抗體規(guī)格：5g

幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)elisa試劑盒英文名稱：Hp-IgG ELISA Kit抑癌蛋白AIMP3抗體規(guī)格：100mg

印度刺猬因子(IHH)elisa試劑盒英文名稱：IHH ELISA Kit相關(guān)蛋白AKAP抗體規(guī)格：1g

吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)elisa試劑盒英文名稱：IDO1 ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白6抗體規(guī)格：250mg

音猬因子N端(Shh-N)elisa試劑盒英文名稱：Shh-N ELISA Kit肺α/β解酶蛋白1抗體規(guī)格：5g

抑制素B(INH-B)elisa試劑盒英文名稱：INH-B ELISA Kit解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體規(guī)格：25g

抑制素A(INH-A)elisa試劑盒英文名稱：INH-A ELISA Kit解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體規(guī)格：5g

抑瘤素M(OSM)elisa試劑盒英文名稱：OSM ELISA Kit解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體規(guī)格：1g

乙型肝炎核心抗體(HBcAb)elisa試劑盒英文名稱：HBcAb ELISA Kit肺α/β解酶蛋白3抗體規(guī)格：250mg

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)elisa試劑盒英文名稱：HBsAg ELISA Kit三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白F亞基3抗體規(guī)格：5g

乙型肝炎表面抗體(HBsAb)elisa試劑盒英文名稱：HBsAb ELISA Kit三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A亞基5抗體規(guī)格：100g
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