包裝規(guī)格:48T/96T
檢測方法:酶聯(lián)免疫大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1βELISA 試劑盒代理
檢測標(biāo)本:血清、血漿、尿液、組織勻漿等
本試劑盒僅供科研使用!
試劑盒組成
| 名 稱 | 96孔配置 12孔×8條 | 48孔配置 12孔×4條 | 備 注 |
1 | 標(biāo)準(zhǔn)品(500ng/ml) | 0.5ml | 0.5ml | 稀釋即用型 |
2 | 酶標(biāo)包被板 | 1塊 | 1塊 | 已包被即用型 |
3 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 3ml | 3ml | 即用型 |
4 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml | 3ml | 即用型 |
5 | 30x倍濃縮洗滌液 | 20ml | 20ml | 蒸餾水稀釋 |
6 | *標(biāo)記抗體 | 2ml | 2ml | 即用型 |
7 | 顯色劑A液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
8 | 顯色劑B液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
9 | 終止液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
10 | 說明書 | 1份 | 1份 | 即用型 |
11 | 封板膜 | 2張 | 2張 | 不可反復(fù)使用 |
12 | 密封袋 | 1個 | 1個 | 即用型 |
需要而未提供的試劑和器材大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1βELISA 試劑盒代理
1. 酶標(biāo)儀(450nm檢測波長濾光片,570nm或630nm校正波長濾光片) 。
2. 洗板機(jī)(可調(diào)注液量,保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出)。
3. 超凈工作臺,生物安全柜,通風(fēng)柜。
4. 高精度單道加液器(量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器(8道或12道,量程為50-300μl).
6. 37℃恒溫箱。
7. 低溫離心機(jī)。
8. 電冰箱(4℃,-20℃,-86℃).
9.漩渦混合儀,低頻振蕩器等
注意事項(xiàng)
1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3. 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
4. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1βELISA 試劑盒代理
6. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
7. 各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
8. 每次試驗(yàn)測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
9. 配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。
10. 實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。
11. 手工洗板應(yīng)注意:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
樣本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放,時間做相應(yīng)溫度調(diào)整,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,(由于樣本種類過多,每個單位處理方式不一樣,本說明書不做詳細(xì)介紹)。
操作程序
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋)按下表格執(zhí)行:
250ng/ml | (5號標(biāo)準(zhǔn)品) | 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
125ng/ml | (4號標(biāo)準(zhǔn)品) | 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
62.5ng/ml | (3號標(biāo)準(zhǔn)品) | 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
31.2ng/ml | (2號標(biāo)準(zhǔn)品) | 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
15.6ng/ml | (1號標(biāo)準(zhǔn)品) | 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加樣:(詳細(xì)操作流程請客服索要說明書)
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
8. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判斷
1.每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸)
2.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計(jì)算。
3.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),OD值作縱坐標(biāo),以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。*使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析計(jì)算結(jié)果。
4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,計(jì)算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。