操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒
英文名稱：Endotoxin semi-quantitative kit(Gel Method)
產(chǎn)品規(guī)格：10×0.1mL
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0163415
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒又稱鱟試劑，為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品。鱟試劑中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下(溫度，pH值及無干擾物質(zhì))，細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子，引起一系列酶促反應(yīng)，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。 儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，陰涼處避光保存，有效期兩年。 使用方法： 一、樣品溶液的制備 樣品的pH值應(yīng)在6.0–8.0 之間，若出此范圍，需用無熱原緩沖液或0.1N氫氧化鈉、0.1N 鹽酸調(diào)節(jié)。若樣品中可能存在鱟實(shí)驗(yàn)的干擾物質(zhì)，見本說明書4.2“樣品的干擾實(shí)驗(yàn)”。若樣品中可能含有導(dǎo)致鱟試劑中G 因子旁路反應(yīng)的(1,3)β－D－葡聚糖，需選用不會(huì)對(duì)(1,3)β－D－葡聚糖起反應(yīng)的特異性鱟試劑。 二：細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液及對(duì)照液的準(zhǔn)備 2.1細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液(本試劑盒不提供) ?取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品1支，按《細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品使用說明書》配制2λ ，1λ ,0.5λ,及0.25λ的一系列內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液(λ為鱟試劑靈敏度標(biāo)示值)。備用。 ?注：鱟試劑靈敏度復(fù)核實(shí)驗(yàn)見本手冊(cè)其他常用實(shí)驗(yàn)方案。 2.2 陰性對(duì)照液：即無內(nèi)毒素水。 2.3 陽性對(duì)照液：即濃度為2λ的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。 2.4樣品陽性對(duì)照液：即添加濃度為2λ內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)的樣品溶液。 三：內(nèi)毒素檢測(cè) 3.1 鱟試劑的溶解：按標(biāo)示量(本試劑盒為0.1mL/支)加無內(nèi)毒素水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑*溶解。注意不要引起氣泡，溶解后的試劑應(yīng)在10 min內(nèi)使用(即配即用)。 3.2樣品溶液的制備 ?樣品大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的計(jì)算： ?MVD＝ C?L/λ ?λ：測(cè)試用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值(EU/mL)；L：樣品細(xì)菌內(nèi)毒素限值；C：樣品濃度或樣品復(fù)溶后所得樣品濃度。當(dāng)L 單位為EU/mL(溶液)時(shí)，C的單位為1mL/mL；當(dāng)L單位為EU/mg或者EU/U時(shí)，C的單位為mg/mL或者U/mL。按照計(jì)算所得體積，加無內(nèi)毒素水制備樣品溶液。 3.3 各反應(yīng)管中分別加入0.1mL 陰性對(duì)照液，陽性對(duì)照液，樣品，或樣品陽性對(duì)照液。 ?封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入37℃的恒溫器中溫育60分鐘±2分鐘，溫育期間避免振動(dòng)。 3.4 結(jié)果判斷 3.4.1 將試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉(zhuǎn)180°。若管內(nèi)的內(nèi)容物呈堅(jiān)實(shí)凝膠，不變形，不從管壁滑脫為陽性，記錄為(+)；不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管壁滑脫為陰性，記錄為(－)。 3.4.2 只有當(dāng)陰性對(duì)照管結(jié)果均為陰性，陽性對(duì)照管、樣品陽性對(duì)照管結(jié)果均為陽性，實(shí)驗(yàn)方有效，否則無效。若陰性對(duì)照管為陽性，提示鱟試劑、無內(nèi)毒素水或?qū)嶒?yàn)器具可能受到污染。若陽性對(duì)照管為陰性，提示鱟試劑活性減失、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液效價(jià)降低，鱟試劑的靈敏度或內(nèi)毒素的效價(jià)標(biāo)示不準(zhǔn)確，或內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋不正確。若樣品陽性對(duì)照管為陰性，提示反應(yīng)體系內(nèi)有干擾因素存在。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒（帶濾膜）
真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒
動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒
抑制劑 10g Polyphyllin D 50773-41-6 中文名：重樓皂苷D 分子式：C44H70O16 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
檢測(cè) Alkaline phosphatase (AKP) detection Polypodine B 中文名：水龍骨甾酮B 分子式：C27H44O8 度：97.5%
測(cè)試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 Tetracaine 136-47-0 分子式：C15H25ClN2O2 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
測(cè)定試劑盒（紫外比色法） Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt 153012-37-4 中文名： 分子式：C28H42N6O8S2
1:250 250g Polyphyllin D 中文名：重樓皂苷D 分子式：C44H70O16 度：98.0%
凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒蟛蜞菊內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg 犬巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒 Canine Macrophage-Derived Chemokine,MDC/CCL22 ELISA Kit
霹靂蘿芙木堿 HPLC≥98% 10mg 英文名稱HumapPELISAKit人血栓前體蛋白(TpP)規(guī)格：96T/48T
平貝堿甲 HPLC≥98% 20mg 化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測(cè)定試劑盒20
蘋果酸 HPLC≥98% 20mg RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1elisa大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)elisa規(guī)格：96T/48T
蒲公英賽醇 HPLC≥98% 20mg 小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)elisa ，英文名： REG-1a ELISA Kit
蒲公英甾醇 HPLC≥98% 20mg 小鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測(cè)試劑盒MousecoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T
蒲公英甾醇乙酸酯 HPLC≥98% 10mg 人精脒/精胺N(1)-乙酰轉(zhuǎn)移酶樣蛋白1(SATL1)試劑盒 Human SATL1 ELISA Kit
HPLC≥98% 20mg RatAngiogenin,ANGELISAKit大鼠血管生長(zhǎng)素(ANG)elisa規(guī)格：96T/48T
七葉苷XVII HPLC≥98% 20mg 載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
七葉樹皂苷B HPLC≥98% 20mg mouseadrencocoicoopichormone,ACTHelisa小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa規(guī)格：96T/48T
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
