操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：柱式質(zhì)粒DNA小提試劑盒(1～4mL)
英文名稱：Plasmid DNA Mini Kit(1-4mL)
產(chǎn)品規(guī)格：100次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0163392
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。本產(chǎn)品基于改良后的堿變性法，先菌體經(jīng)堿裂解法處理使基因組DNA和質(zhì)粒DNA均變性，再用酸中和，質(zhì)粒DNA客戶快速?gòu)?fù)性，而基因組DNA不能快速?gòu)?fù)性，故可以通過(guò)離心去除，除去后含質(zhì)粒的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒DNA，洗去雜質(zhì)，即可得到純化的質(zhì)粒DNA。 試劑盒特點(diǎn)： 快速、步驟少，整個(gè)操作在30分鐘左右完成。 不需要預(yù)平衡離心吸附柱。 通用洗柱液即開(kāi)即用，不需要用戶額外加乙醇。 溶液B中有藍(lán)色染料，便于目測(cè)非常關(guān)鍵的堿變性和中和反應(yīng)兩步的溶液混勻狀況，保證實(shí)驗(yàn)效果。 產(chǎn)量高，一次可以處理1～4mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2～5μg/mL（取決于質(zhì)粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。 純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8～2.0之間，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。 運(yùn)輸及保存： 常溫運(yùn)輸和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)12～16小時(shí)（搖床轉(zhuǎn)速200-300）。注意：建議使用LB培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會(huì)使菌體濃度過(guò)高，過(guò)純化系統(tǒng)處理能力而降低DNA質(zhì)量。另外，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間會(huì)因細(xì)胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒DNA濃度降低。 用1.5mL離心管收集1～4mL過(guò)夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫12000rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。 次使用本試劑盒時(shí)，先將全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，搖勻后再取用，未用完的溶液A放4℃保存。 加入250μL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細(xì)胞未充分懸浮會(huì)影響后續(xù)堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至*混勻。 加入250μL溶液B（如果溶液B在低溫放置產(chǎn)生沉淀，須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復(fù)顛倒混勻看到溶液的藍(lán)色變得均勻并且溶液變粘即可（一般需要顛倒4～6次），然后冰上放置不過(guò)5分鐘。注意：冰上放置不要過(guò)5分鐘，否則質(zhì)粒DNA會(huì)有堿損傷。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷?，否則基因組DNA斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒DNA。 溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(huì)進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的堿，降低其效率。如果溶液B顏色不是藍(lán)色，則表示變質(zhì)，應(yīng)該棄之不用并且速跟聯(lián)系。 加入350μL冰上預(yù)冷的溶液C，溫和反復(fù)顛倒直到溶液顏色變成無(wú)色（一般需要顛倒混勻4～6次）?；靹蚝罂梢?jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生，然后冰上放置至少5分鐘讓質(zhì)粒DNA復(fù)性。 12000rpm離心3分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀物即可。如果此步的離心在4℃進(jìn)行，可減輕沉淀物漂浮。 靜置2分鐘以讓質(zhì)粒DNA與離心吸附柱充分結(jié)合，保證靜置不少于2分鐘十分重要。 室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。 加入500μL的通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會(huì)揮發(fā)。 重復(fù)上步1次。 室溫12000rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用（如殘留乙醇使DNA溶液在電泳上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中）。 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管（自備）中，加入30～100μL 65～80℃預(yù)熱的DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用于洗脫，但產(chǎn)量稍微有所降低。 室溫12000rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒DNA。 由于我公司的吸附柱結(jié)合DNA能力較，如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質(zhì)粒DNA（相當(dāng)于次洗脫的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來(lái)洗脫。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專(zhuān)人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專(zhuān)車(chē)。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無(wú)-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
植物谷氨酰半胱合成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
植物硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
藻類(lèi)細(xì)胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
植物亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
上 英文名稱： Adrenalin/ 英文縮寫(xiě)： ADR 規(guī)格： 48T/96T 3-Hydroxycatalponol 265644-24-4 中文名： 分子式：C15H18O3 度：97.0% 關(guān)鍵詞： 四氫萘酮; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
上皮鈣粘蛋白 英文名稱： Human E.cadherin 規(guī)格： 48T/96T 2''-O-Acetylsprengerinin C 中文名： 分子式：C46H72O17 度：%
山羊胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）elisa 3-Cyclopropylmethoxy-4-difluoromethoxybenzoic acid 162401-62-9 中文名： 分子式：C12H12F2O4
山羊胰島素 英文名稱： lnsulin 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫(xiě)： INS 3-Ethoxya-3,5-dien-17-one 中文名：3-乙氧基-雄甾-3,5-二烯-17-酮 分子式：C21H30O2
山羊血小板衍化生長(zhǎng)因子（PDGF）elisa 組裝/原裝 3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene 中文名： 分子式：C13H9ClFNO3 度：98.0%
柱式質(zhì)粒DNA小提試劑盒(1～4mL)硫脒；先鋒18號(hào) Cefathiamidine 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR ELISAKitAP人規(guī)格：48T/96T
D-絲 H-D-Ser-OH 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa ，英文名： MDC/CCL22 ELISA Kit
D-絲甲酯鹽酸鹽 D-Serine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 96T/48T
D-蘇 H-D-Thr-OH 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人催產(chǎn)素受體(OX)試劑盒 Human OX ELISA Kit
D-色甲酯鹽酸鹽 D-Tryptophan methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：0.98 Raetinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKit大鼠醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)elisa規(guī)格：96T/48T
N-乙酰-D-色 N-Acetyl-D-tryptophan 質(zhì)量規(guī)格：0.98 HOECHST33342和PROPIDIUMIODIDE細(xì)胞膜變檢測(cè)試劑盒50
D-酪甲酯鹽酸鹽 H-D-Tyr-OMe·HCl 質(zhì)量規(guī)格：0.99 MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinelisa小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)elisa規(guī)格：96T/48T
2'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷 2'-O-Methyladenosine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)elisa ，英文名： MCSF ELISA Kit
D-纈 D-Valine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 96T/48T
2'-脫氧鳥(niǎo)苷-3'-單二鈉 2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠血管生成素2(ANG-2)試劑盒 Rat Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用
