生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。
中文名稱：柱式真菌DNA大量提取試劑盒(玻璃珠法)
英文名稱：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
產(chǎn)品規(guī)格：4次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0163397
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒在柱式真菌(BTN70901)基礎(chǔ)上改良而得大提升級(jí)產(chǎn)品，主要用于大量快速?gòu)母鞣N真菌材料中提取基因組DNA。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 1.處理量大，一次可以處理1-3g 各種真菌組織。 2. 純度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制劑，得到的DNA可以不經(jīng)稀釋直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。 3. 采用玻璃珠法破碎細(xì)胞，屬于物理方法，遠(yuǎn)比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學(xué)破壁法重復(fù)性好，也不容易帶入外援真菌DNA。 4.產(chǎn)率一般在10-100μg/g真菌樣品。離心吸附柱大吸附量為800μg。 5. DNA片段長(zhǎng)度一般在20-40kb左右。 6.適用范圍廣，適用于度大多數(shù)真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。 儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸,4℃保存，有效期一年。 使用方法： 1. 對(duì)菌液：取60-100mL 過(guò)夜培養(yǎng)的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干凈的塑料離心管中，12000rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。 2. 對(duì)菌落：用接種針在在培養(yǎng)基上刮取盡可能多的真菌菌落(約1 g)，轉(zhuǎn)移到裝有20mL 無(wú)菌水的干凈的塑料離心管中，洗滌下接種環(huán)上的菌體。12000rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。 3. 對(duì)孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到離心管中，在材料中加入無(wú)菌水20mL，振蕩半分鐘后12000rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。 4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，渦旋震蕩10分鐘，可以延長(zhǎng)震蕩時(shí)間。 5. 加入10mL的溶液B，渦旋震蕩5分鐘，12000rpm離心2分鐘，將上清液全部轉(zhuǎn)移到一個(gè)50mL的干凈的塑料離心管中。 6.在上清中加入3倍體積的溶液C，顛倒數(shù)次混勻后，分三次上離心吸附柱，每次上柱后均先室溫放置2分鐘，然后12000rpm離心1分鐘，倒掉穿透液，再次上柱，重復(fù)上面的操作，直到掛柱步驟完成。 7. 將20mL 通用洗柱液加入離心柱，12000rpm離心1分鐘，棄穿透液。 8. 重復(fù)上步操作一次。 9. 12000rpm 空甩1分鐘去除殘留液體。 10. 將離心柱放置在一新的50mL塑料離心管中，加入500μL DNA 洗脫液2.0。 11.室溫放置5分鐘后12000rpm離心1分鐘，管底即為真菌DNA樣品，吸取離心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，離心洗脫以收集更多的DNA。 12. 所得DNA可立即使用，也可長(zhǎng)期保存在－20℃。 13. 注：如離心機(jī)轉(zhuǎn)速不能達(dá)到12000rpm，可以用大轉(zhuǎn)速離心10-15min 代替12000rpm離心1-2min。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無(wú)-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
植物F型氫ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
動(dòng)物細(xì)胞P型ATP酶（P type ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
動(dòng)物組織P型ATP酶（P type ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)菌P型ATP酶（P type ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
酵母P型ATP酶（P type ATPase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
Rat angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 大鼠生成素1(ANG-1)elisa 1-Naphthol 90-15-3 中文名： 分子式：C10H8O Rat angiogenin (ANG) ELISA Kit 大鼠生長(zhǎng)素(ANG)elisa 2-(2-Aminothiazole-4-yl)-2-methoxyiminoacetic acid 中文名：氨噻肟酸 分子式：C6H7N3O3S
rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 兔子促甲狀(TSH)elisa 96T/48T 進(jìn)口分裝 22-Dehydroclerosterol glucoside 中文名： 分子式：C35H56O6 度：%
rabbittelomerase,TEELISAKit 兔子端粒酶(TE)elisa 96T/48T 進(jìn)口分裝 2,2'-Dithiobisbenzanilide 中文名：2,2'-二苯甲酰氨基二苯二硫 分子式：C26H20N2O2S2 度：98.0%
rabbitplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit 兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)elisa 96T/48T 進(jìn)口分裝 2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phenoxy]ethyl methanesulfonate 160969-03-9 中文名： 分子式：C11H13F3O5S 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
柱式真菌DNA大量提取試劑盒(玻璃珠法)黃柏酮 Obacunone 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)ELISA檢測(cè)試劑盒Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 96T/48T
黃豆黃苷 Glycitin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠銅藍(lán)蛋白(CP)試劑盒 Rat ceruloplasmin(ferroxidase)(CP)ELISA kit
黃豆黃素 Glycitein 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatcarbonicanhydraseELISAKit大鼠酶(CA)規(guī)格：96T/48T
黃獨(dú)素B Diosbulbin B 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 化妝品阿斯巴塘(aspaame)含量薄層色譜法定性檢測(cè)試劑盒20
黃連堿 Coptisine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitVEGF-B人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B規(guī)格：48T/96T
黃芪皂苷I Astragaloside I 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠含TCP1伴侶蛋白亞基2(CCT2)elisa ，英文名： CCT2 ELISA Kit
黃芪皂苷II Astragaloside II 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人脫氧尿三0酸(DP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humandeoxyuridineiphate,DPELISAKit 96T/48T
黃芪皂苷III Astragaloside III 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠同型半胱(Hcy)試劑盒 Rat Homocysteic acid,Hcy ELISA Kit
黃芪總皂苷 Astragaloside 質(zhì)量規(guī)格：UV≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatcarbonicanhydraseELISAKit大鼠酶(CA)規(guī)格：96T/48T
黃杞苷 Engeletin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 化妝品阿斯巴塘(aspaame)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
