標(biāo)記抗體的原理:
目前較為常用的標(biāo)記抗體的方法,FITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,FITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價(jià)結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個(gè)抗體分子上最多能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子,被標(biāo)記的抗體仍能保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線或藍(lán)紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行觀察或利用流式細(xì)胞儀分析,從而對(duì)抗原進(jìn)行定性、定位或定量。
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究實(shí)驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體直銷 |
英文名稱 | phospho-ATG4D(Ser467) |
貨號(hào) | BJ-K96655 |
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋巴細(xì)胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對(duì)免疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對(duì)D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度的一類球蛋白,約占免疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機(jī)體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時(shí)間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免疫中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬(wàn)~18萬(wàn),可以通過(guò)兔的胎盤(pán),但不能通過(guò)豬和牛的胎盤(pán)。在體內(nèi)可以有效地抵抗細(xì)菌、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個(gè)球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量?jī)H次于IgG,分子量90萬(wàn),是體內(nèi)的球蛋白。抗原初次刺激機(jī)體后,IgM出現(xiàn)最早,在血清中的含量?jī)H次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過(guò)激活補(bǔ)體發(fā)揮溶菌、溶細(xì)胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免疫作用很強(qiáng),是IgG的100倍,但由于含量?jī)H為IgG的1/10,且持續(xù)時(shí)間短,所以在抗感染免疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬(wàn),亦稱為血清型IgA,有抗菌和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細(xì)胞產(chǎn)生,分子量40萬(wàn),含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止細(xì)菌或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬(wàn),由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在細(xì)菌表面,當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過(guò)敏反應(yīng)。在機(jī)體抵抗細(xì)菌和病毒的感染中幾乎無(wú)作用。多克隆抗體制備過(guò)程:
蛋白抗原
↘抗原準(zhǔn)備→兔、小鼠免疫→抗血清→抗體純化 →鑒定(ELISA、WB、IHC)
多肽偶聯(lián) ↗ (抗原親和純化)
從細(xì)胞中提取出來(lái)的生物大分子是不純凈的,必須進(jìn)一步分離純化才能獲得純品。在生物大分子制備工作中,分離純化是比較復(fù)雜和重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。對(duì)于異類的物質(zhì),如提純蛋白質(zhì)和酶時(shí)混雜著核酸,提純核酸時(shí)混雜著蛋白質(zhì)或多糖,一般可用專一性酶水解、有機(jī)溶劑抽提、選擇性分部沉淀等方法處理,小分子物質(zhì)常在整個(gè)制備過(guò)程中多次液相與固相互相轉(zhuǎn)化被分離或用透析方法除去。而對(duì)同類物質(zhì),如酶和雜蛋白,RNA和DNA以及不同結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)、酶、核酸之間的分離,情況則復(fù)雜得多,主要應(yīng)用的方法有電泳法、超速離心法、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、吸附法、結(jié)晶法、電點(diǎn)沉淀法、柱層析法
抗原抗體反應(yīng)影響因素:
(一)反應(yīng)物自身的因素
5) 抗體:不同來(lái)源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗(yàn)的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).
6) 抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價(jià)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.
(二)反應(yīng)環(huán)境條件
7) 酸堿度:抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行.蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn).抗原抗體反應(yīng)一般在pH6~9進(jìn)行,有補(bǔ)體參與的反應(yīng)pH為7.7.4,pH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原與抗體反應(yīng).
8) 溫度:在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng),抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多,使反應(yīng)加速.一般為15℃~40℃,常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃,溫度如高于56℃,可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗(yàn)都有其*的最適反應(yīng)溫度要求.此外,適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸,加速反應(yīng).
9) 電解質(zhì):抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無(wú)電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng).為了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液
IGFBP2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP2 蛋白 (His 標(biāo)簽)野鳶尾黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Irisflorentin
FC33(胚胎腎細(xì)胞(Asp-2基因修飾)) 5×106cells/瓶×2 小鼠巨噬細(xì)胞MMa刺芒柄花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ononin
外周血白細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)刺五加苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Eleutheroside E
YES1 Others Human c-Yes / YES1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 刺五加皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ciwujianoside B
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK川陳皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Nobiletin
Promocell C-26502 Follicle Dermal Papilla CellGrowth Medium KIT, 細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500mlTOLUIDInepLUEOCERTIFIED胺藍(lán)O生物染料級(jí)色至暗綠色精細(xì)粉末RTsigma
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-acf-prf試劑Ⅰ MagnesonⅠ,90% 74-39-5 50G 通用試劑
OMG Others Human OMG / OMGP (aa 1-416) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 還原型 Glutcthionq 70-18-8
DQSHS1 迪慶綿羊皮膚成纖維樣細(xì)胞Glyceryltriacetate甘油三乙酸酯100克CP
CM-M062小鼠腎小管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL112-59-4二乙二醇一己2-(2-HEXYLOXYETHOXY)ETHANOL
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體直銷A549, 肺癌細(xì)胞系硝唑尼特Nitazoxanide質(zhì)量規(guī)格:>99%
THP 1細(xì)胞,單核細(xì)胞型瘤細(xì)胞 前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系,PC-3M 2B4細(xì)胞 結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF NA硝唑尼特(標(biāo)準(zhǔn)品)Nitazoxanide質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A寡霉素AOligomycin A質(zhì)量規(guī)格:>95%,美國(guó)進(jìn)口原裝
ESAM Others Human ESAM 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Olopatadine HCl質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),度大于99%
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來(lái)自NIH3T3);PA12(標(biāo)準(zhǔn)品)Olopatadine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品