標記抗體的原理:
目前較為常用的標記抗體的方法,FITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,FITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個抗體分子上最多能標記15~20個FITC分子,被標記的抗體仍能保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線或藍紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過熒光顯微鏡進行觀察或利用流式細胞儀分析,從而對抗原進行定性、定位或定量。
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體規(guī)格 |
英文名稱 | ARA24 |
貨號 | BJ-K96810 |
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋巴細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對免疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度的一類球蛋白,約占免疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免疫中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗細菌、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)的球蛋白??乖醮未碳C體后,IgM出現(xiàn)最早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免疫作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染免疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有抗菌和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止細菌或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部淋巴結(jié)中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在細菌表面,當與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機體抵抗細菌和病毒的感染中幾乎無作用。多克隆抗體制備過程:
蛋白抗原
↘抗原準備→兔、小鼠免疫→抗血清→抗體純化 →鑒定(ELISA、WB、IHC)
多肽偶聯(lián) ↗ (抗原親和純化)
從細胞中提取出來的生物大分子是不純凈的,必須進一步分離純化才能獲得純品。在生物大分子制備工作中,分離純化是比較復(fù)雜和重要的一個環(huán)節(jié)。對于異類的物質(zhì),如提純蛋白質(zhì)和酶時混雜著核酸,提純核酸時混雜著蛋白質(zhì)或多糖,一般可用專一性酶水解、有機溶劑抽提、選擇性分部沉淀等方法處理,小分子物質(zhì)常在整個制備過程中多次液相與固相互相轉(zhuǎn)化被分離或用透析方法除去。而對同類物質(zhì),如酶和雜蛋白,RNA和DNA以及不同結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)、酶、核酸之間的分離,情況則復(fù)雜得多,主要應(yīng)用的方法有電泳法、超速離心法、鹽析法、有機溶劑沉淀法、吸附法、結(jié)晶法、電點沉淀法、柱層析法
抗原抗體反應(yīng)影響因素:
(一)反應(yīng)物自身的因素
5) 抗體:不同來源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).
6) 抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.
(二)反應(yīng)環(huán)境條件
7) 酸堿度:抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進行.蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點.抗原抗體反應(yīng)一般在pH6~9進行,有補體參與的反應(yīng)pH為7.7.4,pH過高或過低都將影響抗原與抗體反應(yīng).
8) 溫度:在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運動,抗原與抗體碰撞機會增多,使反應(yīng)加速.一般為15℃~40℃,常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃,溫度如高于56℃,可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗都有其*的最適反應(yīng)溫度要求.此外,適當振蕩也可促進抗原抗體分子的接觸,加速反應(yīng).
9) 電解質(zhì):抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應(yīng).為了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液
大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106D-AlanineD-2-基5克BR,99%
CDH4 Others Human R-Cadherin / CDH4 細胞裂解液 (陽性對照) 2-硼醋 2-Thiophqnqboronic ccid 6162-68-0
扁桃體上皮細胞HTEpiCCobalt(II,III)oxide氧化鈷100克CP
HA Others H5N9 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) wo7iumxy7noXIDEBEADS,珠子試劑級小直徑白色珠子RT不sigma
雪羊皮膚細胞;SSHS1(Earle’s平衡鹽)
A673細胞,橫紋肌瘤細胞 非小細胞肺癌細胞,NCI-H838細胞 CL-0460U14-GFP(小鼠子細胞)5×106cells/瓶×2日落黃FCF,英文名或英文縮寫:Sunset Yellow FCF,級別:FMP,75%,規(guī)格:100克
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K12-氧代-1-基炳晴 2-OXO-1-PYRROLIDINqPROPIOnitnILq 7663-76-2
FGFR2 Others Human FGFR2 細胞裂解液 (陽性對照) N-芐氧羰基-L-谷酰,英文名或英文縮寫:Z-Gln-OH,級別:BR,98%,規(guī)格:100克
MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元3-[(3-膽基)二甲基基]-2-羥基-1-磺酸內(nèi)鹽,英文名或英文縮寫:CHAPSO,級別:ACS,規(guī)格:25克
TNFRSF1A Others Rat 大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 細胞裂解液 (陽性對照) 82-22-41,1-二醌亞胺1,1'-DIANTHRIMIDE
雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體規(guī)格胎牛血清FBS酸洗石棉Asbestos acid washed質(zhì)量規(guī)格:AR
PLXDC1 Others Human PLXDC1 / TEM3 / TEM7 細胞裂解液 (陽性對照) 苊(標準品)Acenaphthene質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC)
CHO 中國倉鼠卵巢細胞鋁標準溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3)Aluminum solution質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3
CL-0038BRL(大鼠肝細胞)5×106cells/瓶×2鋁標準溶液(100µg/mL,基體:5%HCl)Aluminum solution質(zhì)量規(guī)格:100µg/mL,基體:5%HCl
CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系(+/-)-兒茶精(標準品)(±)-Catechin hydrate質(zhì)量規(guī)格:分析標準品