標記抗體的原理:
目前較為常用的標記抗體的方法,FITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,FITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個抗體分子上最多能標記15~20個FITC分子,被標記的抗體仍能保持與相應抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線或藍紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過熒光顯微鏡進行觀察或利用流式細胞儀分析,從而對抗原進行定性、定位或定量。
公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體說明 |
英文名稱 | ATF3 |
貨號 | BJ-K96717 |
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋巴細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對免疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度的一類球蛋白,約占免疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導的抗感染免疫中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗細菌、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應中,參與沉淀反應、凝集反應、補體結(jié)合反應和中和反應。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)的球蛋白。抗原初次刺激機體后,IgM出現(xiàn)最早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免疫作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染免疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應中,參與凝集反應和補體結(jié)合反應。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有抗菌和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止細菌或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部淋巴結(jié)中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在細菌表面,當與相應抗原結(jié)合所引起過敏反應。在機體抵抗細菌和病毒的感染中幾乎無作用。多克隆抗體制備過程:
蛋白抗原
↘抗原準備→兔、小鼠免疫→抗血清→抗體純化 →鑒定(ELISA、WB、IHC)
多肽偶聯(lián) ↗ (抗原親和純化)
從細胞中提取出來的生物大分子是不純凈的,必須進一步分離純化才能獲得純品。在生物大分子制備工作中,分離純化是比較復雜和重要的一個環(huán)節(jié)。對于異類的物質(zhì),如提純蛋白質(zhì)和酶時混雜著核酸,提純核酸時混雜著蛋白質(zhì)或多糖,一般可用專一性酶水解、有機溶劑抽提、選擇性分部沉淀等方法處理,小分子物質(zhì)常在整個制備過程中多次液相與固相互相轉(zhuǎn)化被分離或用透析方法除去。而對同類物質(zhì),如酶和雜蛋白,RNA和DNA以及不同結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)、酶、核酸之間的分離,情況則復雜得多,主要應用的方法有電泳法、超速離心法、鹽析法、有機溶劑沉淀法、吸附法、結(jié)晶法、電點沉淀法、柱層析法
抗原抗體反應影響因素:
(一)反應物自身的因素
5) 抗體:不同來源的抗體,反應性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應,為提高試驗的可靠性,應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應.
6) 抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應,可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應,單價抗原與相應抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.
(二)反應環(huán)境條件
7) 酸堿度:抗原抗體反應必須在合適的pH環(huán)境中進行.蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點.抗原抗體反應一般在pH6~9進行,有補體參與的反應pH為7.7.4,pH過高或過低都將影響抗原與抗體反應.
8) 溫度:在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運動,抗原與抗體碰撞機會增多,使反應加速.一般為15℃~40℃,常用的抗原抗體反應溫度為37℃,溫度如高于56℃,可導致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗都有其*的最適反應溫度要求.此外,適當振蕩也可促進抗原抗體分子的接觸,加速反應.
9) 電解質(zhì):抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應.為了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液
C3H/An小鼠結(jié)締組織細胞(L929-TK-);LTK-異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Isorhamnetin 3-sophoroside-7-rhamnoside
Chang liver細胞,CCL13張氏肝細胞正常 APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細胞株(HEK293),APP-PS1細胞 豚鼠皮膚細胞;GP-S3(-)-Holostyligone質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品(-)-Holostyligone
Lncap clone FGC(前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×25-羧基-X-羅丹明質(zhì)量規(guī)格:>97%5-Carboxy-X- rhodamine; 5-ROX
Promocell C-20111 Keratinocyte GrowthMedium 2 KIT, 角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基2型套裝 500ml,丙硫氧嘧啶(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Propylthiouracil
主動脈內(nèi)皮細胞HAECD-果糖(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品D-Fructose
APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細胞株(HEK293);APP-PS1AMVREVERSETRANSCRIPTASE反轉(zhuǎn)錄酶生物技術(shù)級FROZENsigma
RKO細胞,結(jié)腸腺癌細胞 鼻咽癌細胞系,SUME-a細胞 CL-0371K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細胞)5×106cells/瓶×2;1,4-二羌基丁烷 1,4-Butcnqdiol;1,4-Dixy7noxybutcnq;TqtrcMqthylqnq glycol
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA2-糠醋酯 Mqthyl 2-furoctq 611-13-
IL34 Others Mouse 小鼠 IL-34 細胞裂解液 (陽性對照) 高分子量標準蛋白,英文名或英文縮寫:High range protein MW marker,級別:BR,10u/mg,規(guī)格:1公斤
U-2 OS, 骨肉瘤細胞9000-70-8明膠;白明膠;動物膠;筋膠;銀明膠Gelatin;Puragel
活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體說明H9c2(2-1) (大鼠心肌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0344HAN(羊膜細胞)5×106cells/瓶×2 牛腎細胞;MDBK雙(標準品)Dicoumarol質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
小鼠成纖維細胞;φ2水晶蘭苷(標準品)Monotropein質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
17. 脂肪細胞系統(tǒng)水仙苷(標準品)Narcissoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
CM-R096大鼠表皮角質(zhì)形成細胞*培養(yǎng)基100mLOSU03012OSU-03012(AR-12)質(zhì)量規(guī)格:>98%,有效的重組PDK-1抑制劑
小鼠細胞白血病;L1210 小鼠食管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL斯皮諾素(標準品)Spinosin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品