標記抗體的原理:
目前較為常用的標記抗體的方法,FITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,FITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個抗體分子上最多能標記15~20個FITC分子,被標記的抗體仍能保持與相應抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線或藍紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過熒光顯微鏡進行觀察或利用流式細胞儀分析,從而對抗原進行定性、定位或定量。
公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)規(guī)格 |
英文名稱 | Adrenomedullin |
貨號 | BJ-K96726 |
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋巴細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對免疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度的一類球蛋白,約占免疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導的抗感染免疫中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗細菌、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學反應中,參與沉淀反應、凝集反應、補體結(jié)合反應和中和反應。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)的球蛋白。抗原初次刺激機體后,IgM出現(xiàn)最早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免疫作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染免疫中不能起主要作用。在體外的血清學反應中,參與凝集反應和補體結(jié)合反應。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有抗菌和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止細菌或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部淋巴結(jié)中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在細菌表面,當與相應抗原結(jié)合所引起過敏反應。在機體抵抗細菌和病毒的感染中幾乎無作用。多克隆抗體制備過程:
蛋白抗原
↘抗原準備→兔、小鼠免疫→抗血清→抗體純化 →鑒定(ELISA、WB、IHC)
多肽偶聯(lián) ↗ (抗原親和純化)
從細胞中提取出來的生物大分子是不純凈的,必須進一步分離純化才能獲得純品。在生物大分子制備工作中,分離純化是比較復雜和重要的一個環(huán)節(jié)。對于異類的物質(zhì),如提純蛋白質(zhì)和酶時混雜著核酸,提純核酸時混雜著蛋白質(zhì)或多糖,一般可用專一性酶水解、有機溶劑抽提、選擇性分部沉淀等方法處理,小分子物質(zhì)常在整個制備過程中多次液相與固相互相轉(zhuǎn)化被分離或用透析方法除去。而對同類物質(zhì),如酶和雜蛋白,RNA和DNA以及不同結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)、酶、核酸之間的分離,情況則復雜得多,主要應用的方法有電泳法、超速離心法、鹽析法、有機溶劑沉淀法、吸附法、結(jié)晶法、電點沉淀法、柱層析法
抗原抗體反應影響因素:
(一)反應物自身的因素
5) 抗體:不同來源的抗體,反應性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應,為提高試驗的可靠性,應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應.
6) 抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應,可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應,單價抗原與相應抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.
(二)反應環(huán)境條件
7) 酸堿度:抗原抗體反應必須在合適的pH環(huán)境中進行.蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點.抗原抗體反應一般在pH6~9進行,有補體參與的反應pH為7.7.4,pH過高或過低都將影響抗原與抗體反應.
8) 溫度:在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運動,抗原與抗體碰撞機會增多,使反應加速.一般為15℃~40℃,常用的抗原抗體反應溫度為37℃,溫度如高于56℃,可導致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗都有其*的最適反應溫度要求.此外,適當振蕩也可促進抗原抗體分子的接觸,加速反應.
9) 電解質(zhì):抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應.為了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液
腎小球內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)CAPS; 3-(環(huán)已胺)丙磺酸質(zhì)量規(guī)格:>99%CAPS
STXBP1 Others Human STXBP1 / UNC18A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 巴豆苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Crotonoside
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B6巴西蘇木素(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Brazilin
T/G HA-VSMC細胞,主動脈血管平滑肌細胞 胚肝細胞正常,QSG-7701細胞 CL-0064CoC1(卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2菝葜皂苷元(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Sarsasapogenin
APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WML6.0叔丁基酯質(zhì)量規(guī)格:美國進口Atorvastatin tert-Butyl Ester
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF-mt)(5×105) Hep G2, 肝癌細胞系 Human4-xy7noxybipxenyl對本基酚500克CP,95%
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C32-基本并咪坐;2-基間二氮茚 2-MqthylbqnziMidczolq;2-Mqthyl-1,3-bqnzodiczolq 612-12-6
GUCA1A Others Human GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2'-Fluoroacetopxenone鄰扶本以酮500克CP,98%
表皮色素細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)NEXTGELRUNNINGBUFFER20XNEXT 膠 電泳緩沖液蛋白組學級500MLRT
星形膠質(zhì)細胞 肺癌細胞,NCI-H1869[H1869]細胞 YAC-1(瘤細胞)1,4-二(2-)NA
腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)規(guī)格原代成纖維細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml腺苷 5'-1酰硫酸 鈉鹽Adenosine 5'-phosphosulfate salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
結(jié)直腸腺癌細胞;HT-29 大鼠平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mLN6-苯甲基-5’-乙基甲酰胺基腺苷N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
FO 小鼠骨髓瘤細胞P1,P5-Di(腺苷-5'-)五1酸鹽,五鈉鹽P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate penta salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 細胞裂解液 (陽性對照) P1,P5-Di(腺苷-5'-)五1酸鹽,五銨鹽e pentaammonium saltP1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt質(zhì)量規(guī)格:美國進口
小鼠T瘤細胞(雞OVA基因修飾);E.G7-OVAN6-苯甲基腺苷N6-Benzyl Adenosine 質(zhì)量規(guī)格:美國進口