人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 ELISA 試劑盒
規(guī)格： 96T
檢測(cè)范圍： 31.2pg/ml→2000pg/ml(人血清、血漿等)；
15.6pg/ml→1000pg/ml(細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液等)。
敏感性： ＜1pg/ml
特異性： 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時(shí)）；-20℃（長時(shí)間不用時(shí)）。
有效期： 6 個(gè)月(4℃)；12 個(gè)月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清。
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 ELISA 試劑盒工作原理
血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）是zui重要的血管生長因子之一。二個(gè)亞單位由二硫鍵連接，組
成分子量 46-48KDa 的糖蛋白質(zhì)。VEGF 有多個(gè)亞型。根據(jù)其亞單位所含氨基酸數(shù)量的不同，分
別命名為 VEGF121，VEGF144，VEGF165，VEGF189 和 VEGF206 等。
所提供的人 VEGF ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預(yù)先包被的抗體為單克隆抗體。檢測(cè)相抗體為多克隆抗
體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗
滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的人 VEGF 呈正相關(guān)
內(nèi)容 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
預(yù)包被抗 VEGF 抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標(biāo)準(zhǔn)品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標(biāo)記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復(fù)合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)。
3. 恒溫箱
4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項(xiàng)
1． 使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請(qǐng)及時(shí)與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標(biāo)板是單條可拆型酶標(biāo)板，用戶可按需求使用；剩余的酶標(biāo)板請(qǐng)
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
樣品的準(zhǔn)備和保存
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進(jìn)一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞裂解液——對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常 10 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細(xì)胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測(cè)范圍。根據(jù)待測(cè)因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
稀釋方案：
高——指待測(cè)因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測(cè)因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測(cè)因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測(cè)因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結(jié)：
1． 加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標(biāo)記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數(shù)。
大鼠 雌二醇 E2 Estradiol
大鼠 雌二醇受體 ER Estradiol receptor
大鼠 雌激素 E estrogen
大鼠 雌激素受體 ER Estrogen Receptor
大鼠 促甲狀腺激素 TSH Thyroid Stimulating Hormone
大鼠 促甲狀腺素釋放激素 TRH thyrotropin-releasing hormone
大鼠 促間質(zhì)細(xì)胞激素 ICSH Interstitial cell-stimula-ting hormone
大鼠 促卵泡素 FSH Follicle-stimulating hormone
大鼠 促腎上皮質(zhì)激素釋放激素 CRH corticotropin releasing hormone
大鼠 促腎上腺皮質(zhì)激素 ACTH adrencocorticotropic hormone
