試劑盒組成及試劑配制:
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測服務(wù)。需要其他Elisa試劑盒請咨詢銷售人員。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
IgE豚鼠免疫球蛋白E檢測試劑盒 | IgE ELISA kit | 48T/96T | BJ-E1290 |
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
操作流程:
1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
6洗板,同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
9洗板,同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本s和陰性對照n的 od值后,計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
人解脲脲原體ELISA試劑盒 英文縮寫; MU
人解脲脲原體抗體ELISA試劑盒 英文縮寫; UU-Ab
人解脲支原體IgM抗體ELISA試劑盒 英文縮寫; Uu Casset IgM
人解偶聯(lián)蛋白 1ELISA試劑盒 英文縮寫; UCP 1
人解整合素樣金屬12ELISA試劑盒 英文縮寫; ADAM12
魚白細(xì)胞介素4ELISA試劑盒 英文縮寫; IL-4
魚白細(xì)胞介素6ELISA試劑盒 英文縮寫; IL-6
魚白細(xì)胞介素8ELISA試劑盒 英文縮寫; IL-8
魚半胱胺雙加氧酶ELISA試劑盒 英文縮寫; ADO
魚半胱次磺酸脫羧酶ELISA試劑盒 英文縮寫; CSD
植物脂肪酶ELISA試劑盒 英文縮寫; Lipase
植物納豆ELISA試劑盒 英文縮寫; NK
植物納豆ELISA試劑盒 英文縮寫; NK
植物ELISA試劑盒 英文縮寫; Mannitol
植物胼胝質(zhì)ELISA試劑盒 英文縮寫; callose
IgE豚鼠免疫球蛋白E檢測試劑盒人轉(zhuǎn)甲狀蛋白ELISA試劑盒 英文縮寫; TTR
人轉(zhuǎn)錄因子1ELISA試劑盒 英文縮寫; AP-1
人轉(zhuǎn)錄因子E2F1ELISA試劑盒 英文縮寫; E2F1
人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1ELISA試劑盒 英文縮寫; ATF-1
人轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)孤獨(dú)受體γtELISA試劑盒 英文縮寫; RORγt