在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V進(jìn)行熒光素（EGFP、FITC）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但對凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。
二、注意事項(xiàng)
1、必須活細(xì)胞檢測，不能用能破壞細(xì)胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
2、特殊細(xì)胞的染色方法：在消化或吹打時(shí)，有些細(xì)胞（如神經(jīng)元細(xì)胞）很容易受到損傷，導(dǎo)致晚期凋亡或壞死比例非常高，不能反映真實(shí)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的解決方法：先低速離心，吸取細(xì)胞培養(yǎng)板中的液體，留少許液體，加入適量PI和Annexin-V染色10min后，將漂浮細(xì)胞吸至離心管中，離心洗滌兩次，用PBS漂洗貼壁細(xì)胞兩次，加胰酶消化后將細(xì)胞懸液移至另一離心管中，離心洗滌，再與漂浮細(xì)胞合并后上流式細(xì)胞儀檢測。應(yīng)用該法可降低晚期凋亡和壞死比例，增加早期凋亡細(xì)胞比例。
3、由于Annexin-V為鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，只有在鈣離子存在的情況下與PS的親和力才大，因而在消化細(xì)胞時(shí)，建議一般不采用含EDTA的消化液。
4、必須設(shè)置陰性對照和補(bǔ)償對照（分別單染）。
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V進(jìn)行熒光素（EGFP、FITC）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但對凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。
二、注意事項(xiàng)
1、必須活細(xì)胞檢測，不能用能破壞細(xì)胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
2、特殊細(xì)胞的染色方法：在消化或吹打時(shí)，有些細(xì)胞（如神經(jīng)元細(xì)胞）很容易受到損傷，導(dǎo)致晚期凋亡或壞死比例非常高，不能反映真實(shí)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的解決方法：先低速離心，吸取細(xì)胞培養(yǎng)板中的液體，留少許液體，加入適量PI和Annexin-V染色10min后，將漂浮細(xì)胞吸至離心管中，離心洗滌兩次，用PBS漂洗貼壁細(xì)胞兩次，加胰酶消化后將細(xì)胞懸液移至另一離心管中，離心洗滌，再與漂浮細(xì)胞合并后上流式細(xì)胞儀檢測。應(yīng)用該法可降低晚期凋亡和壞死比例，增加早期凋亡細(xì)胞比例。
3、由于Annexin-V為鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，只有在鈣離子存在的情況下與PS的親和力才大，因而在消化細(xì)胞時(shí)，建議一般不采用含EDTA的消化液。
4、必須設(shè)置陰性對照和補(bǔ)償對照（分別單染）。
