Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10以下是的訂購信息儲(chǔ)存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*104. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會(huì)降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*105. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
CORT 人皮質(zhì)酮/腎上腺酮 規(guī)格: 48T/96T
Cortisol 人 規(guī)格: 48T/96T
CLA 人皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 規(guī)格: 48T/96T
SRF/IF 人皮膚反應(yīng)因子/炎性因子 規(guī)格: 48T/96T
DPT 人皮膚蛋白 規(guī)格: 48T/96T
CTACK/CCL27 人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子 規(guī)格: 48T/96T
FSA 人胚胎性硫糖蛋白抗原 規(guī)格: 48T/96T
CIAP 人牛小腸堿性磷酸酶 規(guī)格: 48T/96T
FⅫ 人Ⅻ 規(guī)格: 48T/96T
FⅩⅢ 人ⅩⅢ 規(guī)格: 48T/96T
FⅩ 人Ⅹ 規(guī)格: 48T/96T
FⅨ 人Ⅸ 規(guī)格: 48T/96T
Ⅷ-Ag 人Ⅷ相關(guān)抗原 規(guī)格: 48T/96T
FⅢ 人Ⅲ 規(guī)格: 48T/96T
FⅡ 人Ⅱ 規(guī)格: 48T/96T
F1+2 人原片段F1+2 規(guī)格: 48T/96T
T-TM 人血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物 規(guī)格: 48T/96T
TR 人受體 規(guī)格: 48T/96T
TAT 人抗復(fù)合物 規(guī)格: 48T/96T
Gelsolin 人凝溶膠蛋白 規(guī)格: 48T/96T
CLU 人凝聚素 規(guī)格: 48T/96T
gelson 人凝膠原蛋白 規(guī)格: 48T/96T
UFC 人尿游離 規(guī)格: 48T/96T
ALB 人尿微量白蛋白 規(guī)格: 48T/96T
UreC 人尿素酶相關(guān)蛋白C 規(guī)格: 48T/96T
PLAUR/uPAR 人型纖溶酶原激活物受體 規(guī)格: 48T/96T
uPA/PLAU 人型纖溶酶原激活物 規(guī)格: 48T/96T
uPA/PLAU 人型纖溶酶原激活物 規(guī)格: 48T/96T
uPA 人型纖溶酶原激活物 規(guī)格: 48T/96T
UK 人 規(guī)格: 48T/96T
UP 人尿蛋白 規(guī)格: 48T/96T
GDI 人鳥苷酸解離抑制因子 規(guī)格: 48T/96T
GEF 人鳥苷酸交換因子 規(guī)格: 48T/96T
ODC 人脫羧酶 規(guī)格: 48T/96T
ODC 人脫羧酶 規(guī)格: 48T/96T
OCT 人氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格: 48T/96T
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 FAK 人黏著斑激酶 規(guī)格: 48T/96T
MAdCAM-1 人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子 規(guī)格: 48T/96T
BDNF 人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
BNP 人腦鈉素/腦鈉尿肽 規(guī)格: 48T/96T