人白介素1受體拮抗劑是一類藥物，用于干預(yù)免疫系統(tǒng)過度活躍引起的炎癥反應(yīng)。它們通過阻斷人白介素1受體的結(jié)合作用，抑制白介素1信號通路的傳遞。白介素1(IL-1)是一種細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)。當(dāng)機體免疫系統(tǒng)異常激活時，過量的IL-1會導(dǎo)致炎癥反應(yīng)過度增強，進(jìn)而引發(fā)疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等。
人白介素1受體拮抗劑通過與白介素1受體結(jié)合，阻斷IL-1的結(jié)合和信號傳遞，從而減輕炎癥反應(yīng)。這些藥物可以減少炎癥細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì)，抑制炎癥基因的表達(dá)，并且還能改善相關(guān)癥狀。它們在治療自身免疫性疾病和其他與炎癥有關(guān)的疾病中發(fā)揮重要作用，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎等。
【白介素1受體拮抗劑洗滌方法】
1.自動洗板機：要求注入的洗滌液為350μl，注入與吸出間隔20-30秒。確保機器運用熟練后，再投入實驗中使用。
2.手工洗板：每孔加洗滌液350μl，靜置30秒后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干。手工洗板時，注意加入洗液的過程中，不要造成孔間污染，從而出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象。
【白介素1受體拮抗劑操作步驟】
從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃。
預(yù)留空白孔(若使用雙波長讀板，空白孔可以不設(shè))。
分別將標(biāo)本或不同濃度人RANKL標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/ml孔加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液)加入相應(yīng)孔中(100μl/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育90分鐘。
提前30分鐘制備生物化人RANKL抗體工作液。
洗板3次。
加入生物化人RANKL抗體工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育60分鐘。
提前30分鐘制備酶結(jié)合物工作液。室溫避光放置。
洗板3次。
除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱，避光孵育30分鐘。
洗板5次。
加入TMB顯色工作液(包括空白孔)100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度的顏色較深，有明顯的顏色梯度的時候，即可終止。試驗顯色反應(yīng)請勿超過30分鐘。
加入終止液(包括空白孔)100μl/孔，混勻后即刻測量OD(450nm)值(10分鐘內(nèi))。
【結(jié)果判斷】
1.每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。(若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸)
2.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如curve expert 1.3進(jìn)行結(jié)果計算。
3.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
注意：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算標(biāo)本含量。
【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
