白介素elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和生物標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
白介素elisa試劑盒操作程序:
1、棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
2、每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.。
3、取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
4、測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
白介素elisa試劑盒使用須知:
1、白介素elisa試劑盒檢測前,檢查各種儀器,打開酶標(biāo)儀,穩(wěn)定20分鐘左右。
2、檢測樣本要澄清,不能含雜物,否則會直接影響結(jié)果。
3、實(shí)驗(yàn)開始前要將試劑盒取出,室溫放置30-40分鐘,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使檢測結(jié)果更為穩(wěn)定。
4、盡量做雙標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn),這樣可以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
5、底物具有毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,要避免接觸。
6、白介素elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中,要使底物避光保存,酶標(biāo)板均可拆卸,多余的部分應(yīng)密封好,低溫保存。