ECL超敏發(fā)光液 Super ECL Plus [ Super ECL Plus Detection Reagent ]
英文 | 中文 | 貨號(hào) | 價(jià)格 |
Super ECL Plus Detection Reagent | Super ECL Plus超敏發(fā)光液 | 045-100 mL | 435 |
Super ECL Plus Detection Reagent | Super ECL Plus超敏發(fā)光液 | 045-500 mL | 1750 |
Super ECL Plus Detection Reagent | Super ECL Plus超敏發(fā)光液 | 045-1L | 3000 |
產(chǎn)品描述:
ECL超敏發(fā)光液用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng),SuperECL Plus超敏發(fā)光液是目前靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑:
(1)具有*靈敏度和高信噪比,可檢測(cè)10~100 fg抗原;
(2)可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
(3)發(fā)光迅速,熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè);
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體。
2. 用途:用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
(2)Western Blot后一次洗膜的同時(shí)新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中,與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度,有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng),使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行,也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
(4)用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
(5)打開(kāi)X光膠片暗盒,在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來(lái)*包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),蛋bai帶面向上。
(6)暗房?jī)?nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
4. 儲(chǔ)存:4℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性:無(wú)特殊毒性,按普通化學(xué)品處理。
6. ECL超敏發(fā)光液注意事項(xiàng):
(1)步驟1~5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量,將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn),低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見(jiàn)但可使X光膠片曝光。不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見(jiàn)的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏,強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000??贵w濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶,導(dǎo)致失敗。對(duì)于大量蛋白需要將SuperECL 稀釋20-25倍使用。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光,應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見(jiàn)的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3,如必需使用勿超過(guò)0.01%。