1. 產(chǎn)品描述:
Super ECL Plus超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng),Super ECL Plus超敏發(fā)光液是目前靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑:
(1)具有*靈敏度和高信噪比,可檢測10~100 fg抗原;
(2)可在日光燈下進行發(fā)光操作;
(3)發(fā)光迅速,熒光可使X光膠片感光達12小時以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體。
2. 用途:用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
(2)Western Blot后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中,與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應,使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
(4)用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
(5)打開X光膠片暗盒,在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來*包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),蛋帶面向上。
(6)暗房內(nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
4. 儲存:4℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性:無特殊毒性,按普通化學品處理。