人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物Elisa試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6個(gè)月
樣品收集、處理及保存方法:
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。((采集大鼠腦脊液)的方法:采集腦脊液時(shí),用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚,剪去背毛暴露皮膚。兩耳連線剪一橫切口((1. 5cm左右),在其中點(diǎn)向尾側(cè)沿皮下剪開2cm,將皮分離兩側(cè),擴(kuò)大視野。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層,并斷端依次拉向尾側(cè)擴(kuò)大視野。注意,有出血時(shí)用干紗布按壓止血,保持術(shù)口清晰。接近頸后黃韌帶時(shí),小心地用7號注射針頭分離附蓋的肌肉,暴露寰枕膜。用lml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角),針斜面向上,針*近水平刺入蛛網(wǎng)膜下腔,固定針體,緩慢抽取腦脊液,一般采集量為100-200微升。)
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
7、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動(dòng),來回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
11、 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物Elisa試劑盒操作方法
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
?3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。