Cell Meter™檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力和增殖的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力和增殖。在正常細(xì)胞中，DNA密度根據(jù)細(xì)胞是生長(zhǎng)，分裂，靜止還是執(zhí)行其正常功能而變化。細(xì)胞周期的進(jìn)程受各種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子之間復(fù)雜的相互作用控制。這些調(diào)節(jié)劑激活轉(zhuǎn)錄因子，該轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合并開啟或關(guān)閉導(dǎo)致細(xì)胞分裂的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。在這種調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的任何失誤都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，這是許多病理狀況（例如腫瘤形成）的基礎(chǔ)。活細(xì)胞研究的潛在應(yīng)用是確定細(xì)胞DNA含量和細(xì)胞周期分布，以檢測(cè)生長(zhǎng)模式的變化，監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡以及評(píng)估腫瘤細(xì)胞的行為和抑制基因的機(jī)制。該特定試劑盒旨在使用Nuclear Red™CCS1（固定細(xì)胞中的細(xì)胞周期染色劑）監(jiān)測(cè)細(xì)胞周期進(jìn)程和增殖。染料穿過透化的膜并插入細(xì)胞DNA中。試劑盒中提供的RNase降解RNA后，Nuclear Red™CCS1的信號(hào)強(qiáng)度與DNA含量成正比?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀（FL2通道）監(jiān)測(cè)給定樣品中處于G0 / G1，S和G2 / M期的細(xì)胞百分比，以及處于凋亡之前的亞G1期的細(xì)胞百分比。
| 流式細(xì)胞儀 | |
| 激發(fā) | 488 nm激光 |
| 發(fā)射 | 610/20 nm濾光片 |
| 儀器規(guī)格 | PE-德州紅通道 |
| 組件A：100X Nuclear Red™CCS1 | 1小瓶（250 µL） |
| 組分B：100X RNase A | 1小瓶（250 µL） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
用5×10 5到1×10 6細(xì)胞/ mL 的密度制備含測(cè)試化合物的細(xì)胞
用70％乙醇固定細(xì)胞
將0.5 µL 100X Nuclear Red™CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL細(xì)胞溶液中
在室溫下孵育30-60分鐘
使用帶有FL2通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞
重要說明
開始實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊薪M分。
程序
用測(cè)試化合物處理細(xì)胞所需的時(shí)間，以誘導(dǎo)凋亡或其他細(xì)胞周期功能。
對(duì)于每個(gè)樣品，以0.5×10 5至1×10 6細(xì)胞/ mL 的密度在0.5 mL PBS中制備細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用yidanbaimei消化，懸浮在10％FBS培養(yǎng)基中，離心（1000 rpm，5分鐘），然后將沉淀重懸于PBS中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞離心（1000 rpm，5分鐘），并將沉淀物懸浮在PBS（1 mL）中。 注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每種細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)凋亡的*細(xì)胞密度。
用70％乙醇固定細(xì)胞：
將0.5 mL細(xì)胞懸液吸移至1.2 mL無(wú)水乙醇中（ZUI終濃度約為70％）。
在冰上孵育細(xì)胞至少2小時(shí)（或在-20°C過夜）。在染色之前，細(xì)胞可以在-20°C下保存2年。注意：在細(xì)胞表面抗原被單克隆抗體染色后，通常將乙醇用于固定，而在細(xì)胞內(nèi)抗原被單克隆抗體染色后，通常將甲醇用于固定。在此過程中，將固定并分析整個(gè)單元格。由于仍然存在整個(gè)細(xì)胞團(tuán)，因此通常包括使用RNase消除任何雙鏈RNA。盡管已經(jīng)對(duì)整個(gè)細(xì)胞進(jìn)行了分析，但嘗試檢測(cè)與DNA結(jié)合的某些細(xì)胞內(nèi)抗原的嘗試可能會(huì)失敗，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)會(huì)從透化的細(xì)胞中漏出（例如綠色熒光蛋白）。在這些情況下，在酒精固定之前，用PBS中的1％多聚甲醛進(jìn)行短暫的預(yù)固定（在4-6°C下10分鐘），將有助于將蛋白質(zhì)保留在細(xì)胞中。
用Nuclear Red™CCS1染色細(xì)胞：
以1000 rpm的速度沉淀細(xì)胞5分鐘，并用冷PBS至少洗滌一次。
將沉淀物懸浮在0.5 mL測(cè)定緩沖液（組分C）中。
加入5 µL 100X Nuclear Red™CCS1（組分A）和5 µL 100X RNase A（組分B）。
在室溫下孵育細(xì)胞30至60分鐘。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。
可選：將細(xì)胞以1000 rpm離心5分鐘，然后將細(xì)胞重懸于0.5 mL檢測(cè)緩沖液（組分B）或您選擇的緩沖液中。
使用FL2通道（Ex / Em = 490/620 nm），通過流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。在目標(biāo)細(xì)胞上門，不包括碎片。
22842 Cell Meter™熒光法細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光 適合于流式細(xì)胞檢測(cè)* Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* 1 kit 22843 Cell Meter™細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死檢測(cè)試劑盒 *三色熒光* Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit *Triple Fluorescence Colors* 1 kit 22844 Cell Meter™TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒 Cell Meter™ TUNEL Apoptosis Assay Kit 1 kit
