名稱 Ishikawa細(xì)胞(人子/宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)
別稱 ISHIKAWA; ISHI
種屬 人
年齡(性別) 39歲
組織來(lái)源 子/宮
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
Ishikawa細(xì)胞(人子/宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)生物安全等級(jí) 1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM(PM150210)+10% FBS(164210-500)+1% P/S(PB180120)
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~32-40 hours
凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度:液氮
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃
保藏機(jī)構(gòu) ECACC; 99040201
細(xì)胞凍存操作要點(diǎn):
1、細(xì)胞凍存前12~24h,換新鮮培養(yǎng)基,使細(xì)胞一直處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
2、待細(xì)胞長(zhǎng)至80%匯合時(shí)*消化,用新鮮培養(yǎng)基吹打后制成細(xì)胞懸液,1000rpm離心10min。懸浮細(xì)胞則直接離心。
3、棄上清,加入凍存液重懸細(xì)胞沉淀,調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL。將細(xì)胞懸液分至凍存管內(nèi),每管1~1.5mL,擰緊蓋子。在管壁上做好標(biāo)記,標(biāo)明細(xì)胞名稱、凍存日期等。
4、按下列順序依次降溫:室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過(guò)夜→液氮保存。也可使用程序降溫盒更為方便,細(xì)胞凍存管放入程序降溫盒內(nèi)可直接放入-80℃過(guò)夜,再轉(zhuǎn)至液氮罐內(nèi)。注意程序降溫盒內(nèi)異丙醇的量必須高于zui低刻度線;凍存5次后異丙醇需要跟換一次,以免影響凍存效果。
5、細(xì)胞凍存后應(yīng)取出一管復(fù)蘇,檢測(cè)細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存,為穩(wěn)妥起見(jiàn)可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng),觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,再繼續(xù)凍存。
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