編號(hào) | 組分名稱 | 貨號(hào)(規(guī)格) | 保存方法 | ||
HP5-100Kit | HP4-500Kit | HP5-1000Kit | |||
1 | pimonidazole HCl (Hypoxyprobe™-1) | 100mg | 200mg | 1000mg | 2-8℃避光 |
2 | CCI-103F (Hypoxyprobe™-F6) | 100mg | 200mg | 1000mg | 2-8℃避光 |
3 | Diluted Rabbit anti-pimonidazole antisera (PAb2627) | 200μl | 200μl | 2×200μl | 2-8℃保存 |
4 | Diluted Rabbit anti-CCI-103F antisera (PAbF6) | 200μl | 200μl | 2×200μl | 2-8℃保存 |
試劑盒組分詳細(xì)描述:
一、Hypoxyprobe-1(Pimonidazole HCl)
Hypoxyprobe-1 是2-硝基咪唑的替代物,其化學(xué)名和*成分是Pimonidazole hydrochloride(Pimonidazole HCl),分子量為290.8,水溶性為400mM(=116 mg/ml),紫外吸收(324nm)的吸光系數(shù)為7020(0.9%生理鹽水)。
Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學(xué)穩(wěn)定性。比如,固體形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光線下室溫保存2年,UV和HPLC分析法評(píng)估無任何降解發(fā)生。溶于0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1,濃度100g/L置于2-8℃保存4.5年,UV和HPLC分析法評(píng)估無任何降解發(fā)生。
作用機(jī)理:缺氧細(xì)胞中Pimonidazole被還原后得以活化。這一活化的中間物與蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸中的巰基基團(tuán)(thiol groups)形成穩(wěn)定的加合物。Mab1抗體結(jié)合這些加合物從而能借由免疫化學(xué)法來檢測。
二、Hypoxyprobe™-F6 (CCI-103F)
Hypoxyprobe-F6(CCI-103F)是帶有6個(gè)磁性相等氟原子的六氟-2-硝基咪唑,分子量為337.2,水溶性為5.3mM(=1.8 mg/ml)。CCI-103F通常以10% DMSO/花生油混合物的形式腹腔注射入動(dòng)物體內(nèi)。
CCI-103F儲(chǔ)存于弱光下非常穩(wěn)定。
作用機(jī)理:缺氧細(xì)胞中CCI-103F被還原后得以活化。這一活化的中間物與蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸中的巰基基團(tuán)(thiol groups)形成穩(wěn)定的加合物。一抗(Anti-CCI-103F抗血清)結(jié)合這些加合物從而能借由免疫化學(xué)法來檢測。
三、Anti-Pimonidazole rabbit antiserum (PAb2627)抗體和Anti-CCI-103F rabbit antiserum (PAbF6)抗體
PAb2627和PAbF6分別特異結(jié)合還原活化后的Pimonidazole 和CCI-103F形成的蛋白加合物,以稀釋的抗血清形式提供。
感興趣組織可用免疫組化檢測(IHC),冰凍切片或者福爾馬林固定的石蠟包埋切片;也可組織降解后用流式分析法檢測;以及WB;
對(duì)福爾馬林固定、石蠟包埋的連續(xù)性組織切片進(jìn)行免疫過氧化物分析,使用100μl anti-pimonidazole或anti-CCI-103F(1:500稀釋)孵育。顯色的山羊抗兔二抗用來顯示缺氧標(biāo)記加合物的分布情況。
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