流式細(xì)胞檢測(cè)樣本的制備介紹

流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞的分析檢測(cè)必須基于單細(xì)胞的基礎(chǔ)上，是流式細(xì)胞術(shù)的基本要求。因此就必須把待檢測(cè)的 外周血、 實(shí)體組織 等樣本 制備成單細(xì)胞懸液。在應(yīng)用中，制備出合格的單分散細(xì)胞 是流式細(xì)胞術(shù)樣本制備技術(shù)中重要的一環(huán)。它要求這種分散細(xì)胞的方法既要使細(xì)胞成為單個(gè)細(xì)胞，又能保持細(xì)胞的固有生物化學(xué)成分及生物學(xué)特性。流式細(xì)胞術(shù)樣品制備大致可分為下面五個(gè)步驟：

①取材必須具有代表性，如取手術(shù)腫瘤組織，必須取瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛部位， 組織等標(biāo)本必須在取材后保持樣 本的新鮮，一般 在室溫 1 個(gè)小時(shí)之內(nèi)處理好樣本或及時(shí)用固定劑或 28 ℃低溫 對(duì)組織進(jìn)行保存；

②對(duì)細(xì)胞的待測(cè)生物化學(xué)成分進(jìn)行熒光染色，制成合適的單細(xì)胞懸液；

③按照廠家提供的軟件程序?qū)颖具M(jìn)行獲取、檢測(cè)和存儲(chǔ)；

④再依照軟件提供的程序?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)分析；

⑤檢測(cè)分析結(jié)果在生物、 醫(yī)學(xué)上的意義進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。

流式細(xì)胞檢測(cè)樣本的制備

原理與操作：

樣本制備儀是是一套安全的，標(biāo)準(zhǔn)化的樣本制備系統(tǒng)，可對(duì)植物或動(dòng)物的實(shí)體組織進(jìn)行自動(dòng)機(jī)械分離，為流式分析、細(xì)胞培養(yǎng)、或 DNA 擴(kuò)增技術(shù)提供高質(zhì)量的樣本。整套系統(tǒng)對(duì)操作人員的技術(shù)要求不高，而且可對(duì)各種類型的組織實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的樣本處理。目前常見的制備儀有 BD 的 Medimachine 系統(tǒng)、圣泰科（Syntec）的 MediMachineII 單細(xì)胞懸液制備系統(tǒng)、美天旎的 GentleMACS 全自動(dòng)組織處理器。

其原理可簡(jiǎn)述成下列三點(diǎn)：

① 首先將獲得的組織除去脂肪和壞死部分，剪成 10mm3左右的小塊和緩沖液（比如 PBS ）一起放入儀器倉(cāng)中。

② 啟動(dòng)儀器，根據(jù)組織的類型和你所需細(xì)胞懸液的要求選擇儀器運(yùn)作的時(shí)間（從10 秒到 4 分鐘不等），對(duì)于任何一種組織 和所需的細(xì)胞懸液分離的時(shí)間都可以標(biāo)準(zhǔn)化，并適用于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室。

③ 組織被分離后，選擇合適的孔徑篩網(wǎng)來純化細(xì)胞懸液，過濾后的懸液將會(huì)進(jìn)入儀器底部的收集區(qū)域。此時(shí)可用注射器收集區(qū)內(nèi)回收我們所需的單細(xì)胞懸液，完成檢測(cè)樣本的制備。