Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

一氧化氮檢測(cè)試劑盒（顯色法）

產(chǎn)品標(biāo)簽

Nitric Oxide (NO) 一氧化氮；NO含量檢測(cè)；分光光度計(jì)檢測(cè)；Griess reagent；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除劑；DAF-FM DA；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

一氧化氮（Nitric Oxide, NO）是一種活性基，在許多關(guān)鍵生理功能中發(fā)揮重要作用。一氧化氮，一氧化氮合酶（NOS）催化jing氨suan的氧化產(chǎn)物，參與宿主防御和發(fā)育、調(diào)節(jié)蛋白活化、以及與功能生物分子之間的直接共價(jià)相互作用。一氧化氮生成后迅速代謝生成亞硝酸鹽（Nitrite）和硝酸鹽（Nitrate），兩種首要的、穩(wěn)定的和非揮發(fā)性的裂解產(chǎn)物，通過對(duì)這兩種產(chǎn)物的測(cè)定能間接反映樣本內(nèi)的一氧化氮水平。

本一氧化氮檢測(cè)試劑盒（Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit）利用經(jīng)典的Griess reagent，對(duì)亞硝酸鹽進(jìn)行定量測(cè)定。本試劑盒以亞硝suan鈉為標(biāo)準(zhǔn)品，通過優(yōu)化的檢測(cè)體系，檢測(cè)下限達(dá)1μM，且在1~100μM范圍內(nèi)具有好的的線性關(guān)系。本試劑盒不僅能檢測(cè)細(xì)胞、組織或培養(yǎng)液中的一氧化氮含量，還能檢測(cè)血清、血漿或尿液中的一氧化氮含量。

產(chǎn)品組成

保存與運(yùn)輸方法

保存：2-8℃避光保存，至少4個(gè)月穩(wěn)定。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃干燥保存，至少1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

• 本試劑盒內(nèi)的組分若保存不當(dāng)發(fā)生顏色變化或沉淀，說明溶液已經(jīng)失效，請(qǐng)勿再用。

• 當(dāng)檢測(cè)細(xì)胞或組織一氧化氮含量，不建議使用RIPA裂解液，因其可能在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生沉淀，影響測(cè)試。建議使用免疫印跡及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑）（貨號(hào)：MP1508-100ML）。

• 本試劑盒僅測(cè)定的是亞硝酸鹽含量，不能檢測(cè)硝酸鹽，反映的并非總一氧化氮含量，只能在很大程度上反映一氧化氮的相對(duì)量，適合不需要精確定量的實(shí)驗(yàn)。若需要測(cè)定總一氧化氮含量，請(qǐng)選擇總一氧化氮檢測(cè)試劑盒（顯色法）（貨號(hào)：MX4732-50T），此試劑盒利用硝酸鹽還原酶將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，然后利用Griess reagent測(cè)定亞硝酸鹽，進(jìn)而反映總一氧化氮水平。

• 本試劑盒對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)，避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

• 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作步驟

【注意】本試劑盒可用于培養(yǎng)液中的一氧化氮測(cè)定，培養(yǎng)液內(nèi)的酚紅和10%血清對(duì)測(cè)定無明顯干擾。

【注意】本試劑盒可用于血清中的一氧化氮測(cè)定。當(dāng)只需粗略計(jì)算，可直接用水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，從而計(jì)算出血樣中一氧化氮含量。當(dāng)需精確計(jì)算，如果待測(cè)的正常血清是常見血清，能從文獻(xiàn)查閱到一氧化氮濃度，那么用此已經(jīng)一氧化氮濃度的正常血清稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，這樣能得到比較精確的一氧化氮濃度?；蚴褂靡阎獫舛鹊娜嘶蚱渌麆?dòng)物血清來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品也可達(dá)到目的。或參考文獻(xiàn)進(jìn)行血清中一氧化氮濃度的測(cè)定。

【注意】樣品中存在的一些內(nèi)在成分可能會(huì)干擾測(cè)定，導(dǎo)致OD值和靈敏度降低。干擾程度依次順序：尿液>血清>血漿>培養(yǎng)基。

• 需要設(shè)備

96孔酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(jì)，加波長(zhǎng)540nm，或在520~560nm下測(cè)定，靈敏度可能會(huì)降低。

• 準(zhǔn)備步驟

2.1 實(shí)驗(yàn)前將試劑從冰箱取出回溫至室溫。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：每次測(cè)量均新做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用待測(cè)樣品所用溶液來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，使得濃度在1~100μM內(nèi)。

比如：當(dāng)樣品為細(xì)胞培養(yǎng)液上清，細(xì)胞培養(yǎng)液為DMEM+10% FBS，則用DMEM+10% FBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度通常可取0，1，2，5，10，20，40，60，80，100μM。

2.3 樣品準(zhǔn)備：a）當(dāng)樣品為培養(yǎng)液上清，可直接取樣。如果存在沉淀物，則需離心后取上清；b）當(dāng)樣品為組織或細(xì)胞，可快速凍融裂解，然后離心沉淀取上清，體積不足50μl，可用雙蒸水、超純水或0.9% NaCl稀釋（相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品也需用雙蒸水、超純水或0.9% NaCl稀釋）。細(xì)胞或組織也可用免疫印跡及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑）來裂解，同樣的，標(biāo)準(zhǔn)品需用裂解液稀釋。

三、測(cè)定步驟

3.1 取50μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，加入96孔板內(nèi)，做好標(biāo)記；

3.2 每孔加入提前回至室溫的50μl Griess reagent I；

3.3 每孔加入提前回至室溫的50μl Griess reagent II；

3.4 室溫避光孵育5min；

3.5 在540nm（或520~560nm）測(cè)定吸光度。需在30min內(nèi)測(cè)完，以防褪色降低靈敏度。

3.6 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得橫縱坐標(biāo)之間的函數(shù)關(guān)系式。之后將樣品OD值代入公式來計(jì)算一氧化氮濃度。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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一氧化氮檢測(cè)試劑盒（顯色法）細(xì)胞染色

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