溫度驗(yàn)證就是指在某些產(chǎn)品的生產(chǎn)制造過程、存儲(chǔ)、運(yùn)輸過程中，為了保證溫度在一個(gè)規(guī)定的范圍內(nèi)并且符合一定的規(guī)范要求而進(jìn)行的一項(xiàng)驗(yàn)證工作。

 ISO/cGMP/EN/GB等參照標(biāo)準(zhǔn)：我們通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、參照cGMP、ISO等標(biāo)準(zhǔn)及GB國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn) FDA/EU/WHO認(rèn)證認(rèn)可：檢測方案、檢測報(bào)告得到FDA/EU/WHO國外檢察官認(rèn)可

滅菌器溫度驗(yàn)證除了對(duì)設(shè)備的基本要求外，藥廠一般需要針對(duì)滅菌器做以下的一些測試來確保滅菌器的使用是否符合要求。

一、溫度分布：溫度分布一般分為空載溫度分布和負(fù)載溫度分布，負(fù)載溫度分布又根據(jù)實(shí)際滅菌情況一般會(huì)進(jìn)行min負(fù)載以及滿載兩種情況（視實(shí)際滅菌情況而定，不同藥廠需求不一樣，測試條件也就不一樣）

二、熱穿透檢測：一般情況下分為濕熱滅菌和干熱滅菌兩種，由此會(huì)涉及到一些基本概念，滅菌效果衡量F值

F值：在z值條件下，一個(gè)溫度為T，時(shí)間為t的滅菌程序，等效于Tref時(shí)所需要的時(shí)間。

F0值：（濕熱滅菌效果衡量）

    在Z=10℃條件下，一個(gè)溫度為T，時(shí)間為t的滅菌程序，等效于Tref=121.1℃時(shí)所需要的時(shí)間。

FH值：（干熱滅菌效果衡量）

   在Z=20℃條件下，一個(gè)溫度為T，時(shí)間為t的滅菌程序，等效于Tref=170℃時(shí)所需要的時(shí)間

干熱出熱原效果衡量FH值Tref=170℃ Z=54℃

注釋：①滅菌溫度系數(shù)Z值：某微生物的D值下降為之前的1/10所需要升高的溫度

②微生物耐熱參數(shù)DT值：在溫度為T的條件下，使得微生物減少90%所需要的時(shí)間

不同藥廠根據(jù)所需要滅菌的物品的不同，所要求的F0值或Fh值也不同，這個(gè)要根據(jù)具體情況而定。

舉例：某臺(tái)高壓蒸汽滅菌器，所需驗(yàn)證程序有115℃ 30min ；121℃ 20min 和115℃ 30min 是該藥廠用來滅培養(yǎng)基的溫度設(shè)定程序，121℃ 20min一般所滅菌的物品為玻璃器皿、潔凈服、和廢棄菌種這些可以過渡滅殺的物品。這兩個(gè)程序都需要驗(yàn)證空載溫度分布、min負(fù)載熱穿透以及max負(fù)載熱穿透，其中空載溫度分布是驗(yàn)證該滅菌器在空載運(yùn)行狀態(tài)下在滅菌階段時(shí)其腔體內(nèi)部是否能夠滿足溫度分布的要求，負(fù)載熱穿透（max負(fù)載以及min負(fù)載）時(shí)，其滅菌效果是否能夠達(dá)到藥廠所要求的滅菌效果（具體的就是以F0值來體現(xiàn)）

滅菌柜溫度驗(yàn)證的方法如下：

一、空載熱分布測試

1.至少選擇10個(gè)溫度探頭，（較大的滅菌器可以選擇15~20個(gè)探頭），編號(hào)后固定在水平向和垂直向有代表性的空間內(nèi)，幾何中心和角落應(yīng)有代表性點(diǎn)，另外在與溫度控制傳感器相連的冷凝水排放口（低溫點(diǎn)）放置探頭。

2.連續(xù)重復(fù)3次測試應(yīng)符合要求。

注意:

(1)測溫探頭不能與滅菌腔的金屬表面接觸，連接線應(yīng)與設(shè)備密封完好。通常情況下，冷凝的排水口是可能的冷點(diǎn)。

(2)驗(yàn)證過程中無論使用有線傳感器還是無線溫度探頭，探頭必須校正。通常在驗(yàn)證前和驗(yàn)證后全部探頭在恒溫爐中進(jìn)行測試。通?？梢赃M(jìn)行0℃、125℃兩個(gè)條件的測試，各探頭校準(zhǔn)偏差應(yīng)小于±0.5℃(驗(yàn)證設(shè)備有特殊要求時(shí)，可依據(jù)相關(guān)要求進(jìn)行校準(zhǔn)）。

(3)探頭數(shù)量依據(jù)滅菌器托盤而定，但為保證熱分布測試的代表性，探頭必須覆蓋被分化成大致體積一致的整個(gè)空間，生產(chǎn)操作中三點(diǎn)必須要求：冷點(diǎn)的產(chǎn)品探頭、設(shè)備本身附帶的溫度探頭、冷凝排水口探頭。

二、滿載熱分布和熱穿透試驗(yàn)

1.過度殺滅法：測試時(shí)，通常只考慮連續(xù)進(jìn)行3次熱穿透試驗(yàn)，以確保測試點(diǎn)持續(xù)到達(dá)足夠的殺滅效力。熱穿透溫度探頭可以根據(jù)熱分布數(shù)據(jù)放置在難穿透點(diǎn)的滅菌物中。

A 同一物品滅菌時(shí)探頭應(yīng)均一分布；多種物品混裝滅菌時(shí)控頭放置點(diǎn)應(yīng)有代表性，獲得的溫度數(shù)據(jù)可以確定難于滅菌的位置。對(duì)于熱穿透探頭數(shù)量沒有硬性規(guī)定，但minF0值必須大于12分鐘。

B 每個(gè)循環(huán)從開始到滅菌的時(shí)間應(yīng)該一致的，可重現(xiàn)的。就重要性而言，通常只關(guān)注熱穿透數(shù)據(jù)，而對(duì)于熱分布溫度沒有硬性標(biāo)準(zhǔn)。熱分布數(shù)據(jù)多用于考察隨著使用時(shí)間延長設(shè)備本身的性能變化。實(shí)施熱穿透測試時(shí)，如果同時(shí)進(jìn)行熱分布測試，則熱穿透探頭數(shù)量和溫度分布探頭的*比例為5:1。設(shè)備負(fù)荷應(yīng)該考慮一定靈活性，以便生產(chǎn)作業(yè)時(shí)部分裝載。

對(duì)均一滅菌物（如膠塞）而言，負(fù)載中的冷點(diǎn)非常容易識(shí)別。因此部分裝載往往視為已驗(yàn)

證的整體裝載的一部分。注意：負(fù)載的冷點(diǎn)因待滅菌物的包裝方式、結(jié)構(gòu)、滅菌物類型而

不同。實(shí)施熱穿透試驗(yàn)前，首先應(yīng)明確裝載布置圖。

2.殘存概率法：對(duì)于該滅菌方式，滿載熱分布和熱穿透測試應(yīng)分別實(shí)施，并制定詳細(xì)的溫度探頭分布圖。滿載熱分布溫度探頭分布與空載一致。每種裝載的連續(xù)3次測試應(yīng)能夠證實(shí)溫度分布的重現(xiàn)性。熱分布的溫度要求為同一時(shí)刻各點(diǎn)之間的差值應(yīng)不超過2℃。熱穿透測試探頭通常隨著滅菌器容積大小而變化。典型的裝載托盤或裝載車至少配置10只探頭，全部插入相應(yīng)的產(chǎn)品容器，將容器固定在難于穿透的位置進(jìn)行測試。通過驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)熱點(diǎn)、冷點(diǎn)、選擇的溫度控制點(diǎn)之間的關(guān)系。熱穿透數(shù)據(jù)可以證實(shí)負(fù)載內(nèi)所獲取的max溫度和maxF0值，應(yīng)不影響產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性，同時(shí)確保冷點(diǎn)達(dá)到足夠的殺滅效果。

三、微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)

1.在過度殺滅法中，通常選擇菌種G.stearothermophilus或其芽孢，也可采用其他對(duì)濕熱滅菌耐熱性強(qiáng)的微生物。

2.在殘存概率法中典型的生物指示劑包括：Clostridium sporogenes (生梭芽抱桿菌）、Bacillus smithii(史密氏桿菌）和Bacillus subtilis (枯草芽孢桿菌5230)。

生物指示劑可以放置在溫度探頭的測試點(diǎn)附近，滅菌后的生物指示劑通過復(fù)活、相關(guān)的微生物測試程序，應(yīng)證實(shí)滅菌程序可以實(shí)現(xiàn)低于10^-6的存活概率。

四、氣密性試驗(yàn)

將絕壓變送器安裝在滅菌腔室上，抽真空，至內(nèi)室壓力為7kpa（或以下），關(guān)閉全部與滅菌室相連的閥門、真空泵，觀察時(shí)間t和壓力p1 至少等待300秒，但不得超過600秒，讓滅菌器的冷凝水汽化，然后記錄時(shí)間t2和p2 。600秒±100秒之后，再記錄一次t3和p3 計(jì)算600秒內(nèi)的升壓速率=（P3-P2)/(T3-T2)

判定標(biāo)準(zhǔn)：不應(yīng)超出1.3kpa/10min。

滅菌器溫度驗(yàn)證依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：

2010版GMP及指南

ISO 17665 : 《Sterilisation of health care products - moist heat.》

《衛(wèi)生保健品滅菌-蒸汽滅菌》

EN 285：2015 : 《 sterilises  Steam sterilisers – Big sterilisers》

《滅菌 蒸汽滅菌 大型滅菌設(shè)備》

GB 8599-2008《 大型蒸汽滅菌器技術(shù)要求自動(dòng)控制型》

藥品GMP指南2010

YY 0646-2015 《小型蒸汽滅菌器 自動(dòng)控制型》

JBT 20001-2011《注射劑滅菌器》

現(xiàn)行版中國藥典