一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞別稱(chēng)：LOVO ；人結(jié)腸癌細(xì)胞系

種屬來(lái)源：人

年齡性別：男；56歲

組織來(lái)源：直結(jié)腸腺癌，轉(zhuǎn)移位置：左鎖骨上區(qū)

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：LoVo細(xì)胞是于1971年從診斷為結(jié)腸腺癌的56歲男性白人的一個(gè)轉(zhuǎn)移到左鎖骨上區(qū)的腫瘤結(jié)節(jié)建系而來(lái)。癌基因檢測(cè)表明，LoVo細(xì)胞C-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性；癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測(cè)。LoVo細(xì)胞在裸鼠中能成瘤，與107細(xì)胞聯(lián)合皮下接種5只裸鼠21天后全部成瘤。LoVo表達(dá)腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CC-3和CC-4。

生物安全等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：carcinoembryonic antigen (CEA) 908 ng/10^6 cells/10 days. The cells are negative for expression of CSAp (CSAp-) and colon antigen 3.

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CCL-229 BCRC; 60148 BCRJ; 0332 CCLV; CCLV-RIE 1151 DSMZ; ACC-350 ECACC; 87060101；中國(guó)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心

培養(yǎng)基：Ham’s F-12K+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：~34-52 hours

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11，13，14；D13S317：8，11；D16S539：9，12；D18S51：13，18；D19S433：14，15；D21S11：29，31.2；D2S1338：17，18；D3S1358：14，OL；D5S818：11，13；D7S820：10，11；D8S1179：10；FGA：18，20；TH01：9.3；TPOX：8，9；vWA：17，18；

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

d、待細(xì)胞貼壁后，觀(guān)察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

d、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

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