本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
丙酮酸羧化酶（PC）測試盒紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 | BK-01S6979 |
商品介紹：
測定意義: 丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)廣泛存在于動物、霉菌和酵母的線粒體中，催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，是糖異生過程的個限速酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。 測定原理： PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm下測定NADH氧化速率，即可反映PC活性。 需自備的儀器和用品： 分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pP-αSUMO3 pP-αSUMO3 低溫運輸，-20℃保存
葡萄糖銨 20支
2 ug pCaspase3-sensor pCaspase3-sensor 低溫運輸，-20℃保存
副溶血性弧菌成套生化鑒定管（HRGB） 10種*2套/盒*5盒
25mg 牛胰島素 Insulin From Bovine Pancreas -20℃保存
50T 流感嗜血桿菌B型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
5mL 間充質(zhì)干細胞軟骨細胞分化生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
25g Ammonium Persulfate Solution（過硫酸銨溶液），10% Ammonium Persulfate Solution，10% 常溫保存
10mL DNA尿素-PAGE上樣液 DNA Urea-PAGE Loading Buffer -20℃保存
2 ug pGC-silencer-U6-GFP pGC-silencer-U6-GFP 低溫運輸，-20℃保存
麥迪、麥白檢定（普通輕質(zhì)斜面） Wheat albomycin Test Medium 250g
丙酮酸羧化酶（PC）測試盒紫外分光光度法CCDC8 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHA8 原鈣粘附蛋白α8抗體 規(guī)格: 0.2ml
NDUFAF4 激素調(diào)節(jié)增值細胞相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRSRC2 食道抑制生蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
large S protein 人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlCDK5 周期素依賴性激5抗體 規(guī)格: 0.1ml
MLK2/MAP3K10 絲裂原活化蛋白激3K10抗體 規(guī)格: 0.2mlNucleolin/C23 核仁蛋白C23抗體 規(guī)格: 0.2ml
AMBRA1 自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體 規(guī)格: 0.2mlAPS APS抗體 規(guī)格: 0.1ml
GRP 促胃泌素釋放肽抗體 規(guī)格: 0.2mlAPH1a 早老素γ分泌抗體 規(guī)格: 0.2ml
IQCG IQCG蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSOSSC/C9orf80 單鏈DNA結(jié)合蛋白相互作用蛋白1 規(guī)格: 0.2ml
phospho-PRKCA(Ser657+Tyr658) 磷酸化蛋白激C抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PAK4(Ser99) 磷酸化p21激活激4抗體 規(guī)格: 0.1ml
PDZD7 PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCIDE A DNA斷裂因子相似蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-PTK2(Tyr576+Tyr577) 磷酸化粘著斑激抗體 規(guī)格: 0.1mlGlycerol kinase 甘油激抗體 規(guī)格: 0.2ml
ATG1/ULK1 自噬相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlPRR11 富含脯蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2ml
TSHR 促甲狀素受體抗體 規(guī)格: 0.1mlMAGEA10 黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體 規(guī)格: 0.2ml
