特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：淀粉脫分支酶（DBE）測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6692
產(chǎn)品分類：淀粉系列
商品介紹：
測(cè)定意義: DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣?/span>α-1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長(zhǎng)方面有重要的作用。 測(cè)定原理 采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測(cè)定還原糖含量的變化來計(jì)算DBE活性。 需自備的的儀器和用品 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
100g 十二烷基 SDS(Sodium Dodecylsulfate) 室溫密封陰涼干燥保存
50T 微生物致病菌PCR快速檢測(cè)系列 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
10次 一站式檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法） One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit -20℃保存
氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 Mannitol Salt Agar Medium 250g
100µg 葡激 Staphylokinase -20℃保存
250mL SDS Solution（SDS溶液）,10% SDS Solution,10% 常溫保存
1 管 OrgamiB(DE3)大腸桿菌 Origami B(DE3) E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRS41H pRS41H 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
250次 液體樣品RNAout Liquid Sample RNAOUT 4℃保存
2 ug pcDNA4/TO/Myc-His C pcDNA4/TO/Myc-His C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA） Potato Dextrose Agar 250g
淀粉脫分支酶（DBE）測(cè)試盒可見分光光度法VEGFR3 管內(nèi)皮細(xì)胞生因子受體3抗體 規(guī)格: 0.1mlFGF10 成纖維細(xì)胞生因子10抗體 規(guī)格: 0.1ml
MMRN1/ECM 內(nèi)皮細(xì)胞MMRN1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.3ml
VANGL1/LPP2 瘤抑制基因LPP2抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHA5 原鈣粘附蛋白α5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PDGFRA(Tyr988) 磷酸化小板源性生因子受體α 規(guī)格: 0.1mlp73 alpha p53相關(guān)蛋白P73α抗體 規(guī)格: 0.2ml
cGMP 環(huán)磷酸鳥苷抗體 規(guī)格: 0.2mlLipophilin B 親脂性蛋白B抗體 規(guī)格: 0.2ml
ACBD6 ?；oA結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlC21orf87 21號(hào)染色體開放閱讀框87抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 管生成素3/管生成素4抗體 規(guī)格: 0.1ml
FMDV Polyprotein (VPg2 protein) 口蹄疫毒A型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MEF2C(Ser396) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml
PRKAG2/AMPKγ2 苷單磷酸活化蛋白激γ2抗體 規(guī)格: 0.2mlEphB1+EphB2 酪蛋白激受體B1+B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
SIRT1/sirtuin 1 沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.1mlphospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MAP2(Ser136) 磷酸化微管相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlSLC25A20 線粒體二羧酸載體蛋白20抗體 0.1ml
C22orf31 22號(hào)染色體開放閱讀框31抗體 規(guī)格: 0.2mlASTE1 ASTE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
