本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
ATP含量測試盒可見分光光度法 | 50管/24樣 | 可見分光光度法 | BK-01S6549 |
商品介紹:
測定意義: ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。 測定原理: 肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,以此反應(yīng)ATP含量。 自備儀器和用品: 分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
50T 人白血病Major-BCR-ABL融合基因PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
20 μL Ac-IETD-FMK(Caspase 8 Inhibitor) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
50mL Chaps Lysis Buffer Chaps Lysis Buffer 常溫保存
5mL 成骨細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
2 ug pHIL-S1 pHIL-S1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
克氏雙糖鐵瓊脂 Kligler Iron Agar 250g
1瓶 HuTu-80細(xì)胞株 HuTu-80 低溫運(yùn)輸和保存
平板計數(shù)瓊脂(含麥芽提取物) Plate Count Agar 250g
100mg 堿性標(biāo)記親和素 AP-Avidin -20℃保存
250mL Sodium Carbonate Solution(鈉溶液),0.5M,pH9.4 Sodium Carbonate Solution,0.5M,pH9.4 常溫保存
1 管 0F大腸桿菌 0F’E.coli Strain -80℃保存
ATP含量測試盒可見分光光度法DSN1 著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體 規(guī)格: 0.2mlACADL ?;oA脫鏈抗體 0.1ml
ELAVL3/HuC 副瘤綜合癥小腦變性相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
DRAK2 DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.2mlUBR7/C14orf130 14號染色體開放閱讀框130抗體 規(guī)格: 0.2ml
BLNK B淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Paxillin(Tyr88) 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1mlIL-2 白介素2抗體(大、小鼠) 規(guī)格: 0.2ml
Bak Bcl-2同源拮抗劑抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Desmoglein 3/DSG3 橋粒芯蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml
c-Maf 原基因cMAF抗體 規(guī)格: 0.2mlV5 tag V5 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-CHK2 (ser19) 磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激2抗體 規(guī)格: 0.1mlSERPING1/C1 Inactivator 酯抑制蛋白C1IN抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) 磷酸化β抑制蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlTBX18 轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體 規(guī)格: 0.2ml
CCDC47 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-NPM (Ser4) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml