特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：ATP含量測(cè)試盒HPLC法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：HPLC法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6550
產(chǎn)品分類：氧化磷酸化系列
商品介紹：
測(cè)定意義: ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。 測(cè)定原理： 肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量，以此反應(yīng)ATP含量。 自備儀器和用品： 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pSEP2 pSEP2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100mL MAL指示劑培養(yǎng)基 MAL Indicator Medium 常溫
2 ug pCI pCI 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
溶液（20mg） 1ml*5
1g n- 辛基 -β-D- 吡喃葡萄糖苷 n-Octyl-β-D-Glucopyranoside (OGP) -20℃保存
50T 犬布氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1 mg MM4-64（FM®4-64） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH10.0 CAPSO Buffer,0.2M,pH10.0 常溫保存
200mL 電泳級(jí)丙烯酰胺溶液(干粉型) Acrylamide Solution（19:1Po`wder）,EG 常溫
2 ug pGlue pGlue 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100g DNTris Base(三羥甲基氨基甲烷)
ATP含量測(cè)試盒HPLC法LATS1 瘤抑制基因LATS1抗體 規(guī)格: 0.2mlHCG Beta(4H7) 人絨毛膜促性激素β亞基單抗 規(guī)格: 0.1ml
PAX9 配對(duì)盒基因9抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
RFPL4B/RNF211 環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格: 0.2mlANKRD13B 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 規(guī)格: 0.2ml
TNMD/tenomodulin 腱調(diào)蛋白抗體（軟骨調(diào)節(jié)素樣1蛋白） 規(guī)格: 0.2mlCDKN2A/p19ARF p19ARF抑基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-HDAC6 (Ser22) 磷酸化組蛋白去乙酰化6抗體 規(guī)格: 0.1mlAMPK gamma 1 苷酸活化蛋白激γ1抗體 規(guī)格: 0.2ml
SCCA/SERPINB4 絲蛋白抑制劑B4抗體(鱗狀細(xì)胞抗原) 規(guī)格: 0.2ml
TRIM10/RNF9 環(huán)指蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml
SIRT1 沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
MRP5/ABCC5 多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.1ml
KBTBD10 BTB-kelch蛋白家族10抗體 規(guī)格: 0.2ml
USP1 泛素特異性蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GDAP2 誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
