實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
檢測(cè)方法：微量法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6528
產(chǎn)品分類：氨基酸代謝系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL）廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥)，十字花科蕓薹屬 (如卷心菜，菜花，西蘭花)，以及豆科中的合金歡屬中，并通常被稱為蒜酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和半胱亞砜裂解酶的作用下轉(zhuǎn)化成香菇精，以及產(chǎn)生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是內(nèi)源性甲醛生成的關(guān)鍵酶之一，測(cè)定CSL活性對(duì)于研究食品安全具有重要意義。 測(cè)定原理 CSL催化S-甲基-L-半胱亞砜反應(yīng)產(chǎn)生丙酮酸，與2,肼反應(yīng)，在堿性條件下顯棕紅色，在510nm下有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、離心機(jī)、分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
50 T GSH試劑盒（肽測(cè)試盒）（比色法） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 常溫保存
30次 通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒 Universal WGA Kit -20℃保存
2 ug pLVX-aMHC GFP pLVX-aMHC GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
胰胨瓊脂培養(yǎng)基 250g
1瓶 OKT 11細(xì)胞株 OKT 11 低溫運(yùn)輸和保存
胰化大豆瓊脂(TSAM) 250g
1g 溴甲綠 Bromocresol Green Sodium Salt 室溫保存
250m Triton Lysis Buffer Triton Lysis Buffer 常溫保存
1mL APMSF溶液，10mg/mL APMSF Solution -20℃保存
250mL Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB) Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB) 常溫保存
半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL)測(cè)試盒微量法Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 磷酸化活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.2mlCD171/NCAM-L1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mammaglobin A 珠蛋白1抗體 0.2mlphospho-P53(Ser37) 磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml
CYP450 細(xì)胞色素P450單氧化抗體 規(guī)格: 0.1mlHERG/KCNH2/ERG 特異性鉀離子通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-ATR/ACTR(Ser428) 磷酸化ATR抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-BTK/BPK(Tyr223) 磷酸化蛋白酪激ATK抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Wee1(Ser123) 磷酸化WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PAFAH2/Lp-PLA2 脂蛋脂A2抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-CRK (Ser41) 磷酸化CRK抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRS1(Ser332/336) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-APP/ABPP(Thr743) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cdc25A 細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 規(guī)格: 0.1mlSTEAP1 前列跨膜上皮1抗原抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
VWF 管假性友因子/管性友因子抗體 規(guī)格: 0.1mlNogo R 軸索過度生抑制因子受體/Nogo受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
ETK/BMX 非受體性蛋白酪激ETK抗體 規(guī)格: 0.1mlP2RX4 三磷酸苷門控陽離子通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Beta-catenin(Tyr86) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
