特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng)：賴(lài)氨酸（LYS）測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測(cè)方法：微量法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6538
產(chǎn)品分類(lèi)：氨基酸代謝系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 賴(lài)是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴(lài)為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴(lài)含量甚低，且在加工過(guò)程中易被破壞而缺乏，故稱(chēng)為限制性氨基酸。 測(cè)定原理： 蛋白質(zhì)中的賴(lài)具有一個(gè)游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴(lài)的含量成線(xiàn)性關(guān)系。亮與賴(lài)的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個(gè)游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮配制標(biāo)準(zhǔn)液。 需自備的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。 |
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pDsRed-Monomer-Golgi pDsRed-Monomer-Golgi 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
乳糖亞硫酸鹽培養(yǎng)基（LS） Lactose Sulfite Medium(LS) 250g
2 ug pPICZα C pPICZα C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50T 志賀氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
200 mL 小鼠 NK 細(xì)胞分離液1.076 Cell Separation Solution -20℃保存
250mL HEPES Buffer,1M,pH8.5 HEPES Buffer,1M,pH8.5 常溫保存
2mL dTTP溶液，2.5mM dTTP Solution -20℃保存
2 ug pLJM1-EGFP pLJM1-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
Letheen肉湯 Letheen Broth 250g
1瓶 MRC-5細(xì)胞株 MRC-5 低溫運(yùn)輸和保存
EEM培養(yǎng)基 EEM medium 250g
賴(lài)氨酸（LYS）測(cè)試盒微量法Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml
T Beta 10 胸素β10抗體 規(guī)格: 0.1ml
CO4A2 膠原蛋白4a2亞基抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
BCL2L10 BCL2樣10促凋亡蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Prominin 2 造干細(xì)胞抗原CD133相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/PE PE標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
TOPO II/TOPO II Alpha DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體 規(guī)格: 0.1ml
RIMKLA/FAM80A 核糖體蛋白S6修飾樣蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
SULT1E1/Estrogen Sulfotranferase 雌激素硫酸轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.1ml
COMMD9 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-NFATc2(Ser326) 磷酸化核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
