本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
超氧陰離子清除能力測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 可見(jiàn)分光光度法 | BK-01S6461 |
商品介紹：
測(cè)定意義: 超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 測(cè)定原理： AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器： 天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類(lèi)及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻?yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
50T 彈狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
30次 銀染清除劑 Silver Stain Erasol 常溫保存
2 ug SD1211-chip-Ctr SD1211-chip-Ctr 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1次 96孔板質(zhì)粒DNAout（真空法）
2 ug pET-41b(+) pET-41b(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
葡萄糖發(fā)酵管(軍團(tuán)菌) 20支
2 ug pED-DsbA-pp-air pED-DsbA-pp-air 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
20個(gè) 雜交袋 Hybridization Bag 常溫
10次 一管式點(diǎn)突變?cè)噭┖?One-Tube Mutagenesis Kit -20℃保存
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH6.5 MOPS Buffer,0.5M,pH6.5 常溫保存
100次 古細(xì)菌+真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3（rDNA） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
超氧陰離子清除能力測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法BRMS-1 轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml
VMAT2 腦單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Syntrophins/SNTA1/Syntrophin Alpha1 神經(jīng)肌肉接蛋白SNTA1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-SMC1(Ser957) 磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體 規(guī)格: 0.1ml
HEY2 轉(zhuǎn)錄因子HEY2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CCDC40 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體 規(guī)格: 0.2ml
NIPP1/ARD1 核抑制蛋酸1抗體 規(guī)格: 0.2ml
RNF122 環(huán)指蛋白122抗體 規(guī)格: 0.2ml
CKLFSF2 isoform 1 趨化素樣因子超家族成員2亞型1抗體 0.2ml
TRIP 瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
C4orf22 4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框22抗體 規(guī)格: 0.2ml
p53 (FL-393) 瘤抑制基因p53抗體 規(guī)格: 0.2ml
