實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：銅藍(lán)蛋白（Cp）含量測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6434
產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：
測定意義: 銅藍(lán)蛋白是血漿的含銅蛋白，有運(yùn)輸銅的功能，同時(shí)具有氧化酶的活性，是細(xì)胞外液重要的抗氧化劑。 測定原理： 銅藍(lán)蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色產(chǎn)物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍(lán)蛋白活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
100mL HEPES Buffer,0.5M,pH9.0 HEPES Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
0.5mL dNTP溶液，100 mM dNTP Solution，100 mM -20℃保存
2 ug pLentiCRISPR cas9 v.1 pLentiCRISPR cas9 v.1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
TTC-吐溫80-營養(yǎng)瓊脂 TTC Lecithin Tween80 Nutrient Agar 250g
1瓶 MMQ細(xì)胞株 MMQ 低溫運(yùn)輸和保存
Tergitol-7瓊脂 Tergitol-7 Agar 250g
10g 卵清蛋白 Albumin From Chicken Egg White，Grade II 4℃保存
1000mL Transfer or Electro Blotting Buffer,10X Transfer or Electro Blotting Buffer,10X 常溫保存
100µL 小鼠抗HPC4標(biāo)簽蛋白單抗 Anti HPC4-Tag Mouse MAb -20℃保存
2 ug pTALETF_v2 (NI) pTALETF_v2 (NI) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100g RNGuSCN (異硫酸胍) 常溫
銅藍(lán)蛋白（Cp）含量測試盒可見分光光度法BLAME/SLAMF8 BLAME抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRF3(Ser386) 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體 規(guī)格: 0.1ml
ROS/c ros 活性氧簇ROS抗體 規(guī)格: 0.1ml
IASPP 瘤細(xì)胞凋亡ASPP家族的另一個(gè)成員抗體 規(guī)格: 0.1ml
STK31 絲/蘇蛋白激31抗體 規(guī)格: 0.2ml
Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 規(guī)格: 0.1ml
SLC2A4RG/GLUT4 enhancer factor 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4增強(qiáng)因子抗體 規(guī)格: 0.2ml
AGPB/Alpha 1 acid glycoprotein 2 α1酸性糖蛋白2抗體（類粘蛋白2） 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
FAM123B/AMER1/Wilms tumor on the X 母細(xì)胞瘤基因X染色體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cyclin T2 周期素T2抗體 規(guī)格: 0.2ml
SKALP/Elafin 彈性蛋白抑制劑抗體 規(guī)格: 0.2ml
