本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
丙二醛(MDA)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6413 |
商品介紹:
測定意義: 氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。 測定原理: MDA與硫代酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在532nm有最大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質(zhì)的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2ug 克必隆G載體(零背景克隆載體) Magic Vector G -20℃保存
2 ug pMIR-REPORT Luciferase pMIR-REPORT Luciferase 低溫運輸,-20℃保存
特殊蛋白胨 Peptone Special 250g
1瓶 SK-N-SH細胞株 SK-N-SH 低溫運輸和保存
卻普曼瓊脂 Chapman Agar 250g
500g 鈉 Disodium Hydrogen Phosphate 室溫干燥保存
50T 副流感病毒Ⅳ型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
250mL 牛血清白蛋白封堵液 BSA Blocking Solution -20℃保存
2 ug pYX212 pYX212 低溫運輸,-20℃保存
1次 一步法96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法) 96 Microwell Plate One-Step Plasmid DNAOUT 常溫
2 ug pET-44 Ek/LIC pET-44 Ek/LIC 低溫運輸,-20℃保存
丙二醛(MDA)測試盒微量法RanBP2 RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Noxa Noxa蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
BORIS/CT27 瘤/睪抗原27抗體(高遷移率族蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
CD46/MCP (human) 膜輔蛋白抗體(人) 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
ULBP2/N2DL2 UL16結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-EGFR (Tyr1197) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
ESYT1/FAM62A 延伸突觸蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Src(Tyr418) 磷酸化Src原基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
DRD4 多巴胺受體D4抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADAM9 去整合素樣金屬蛋白9抗體 0.2ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP 辣根過氧化物標記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1ml