細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

?

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2化鎘，英文名或英文縮寫：Cadmium iodide，級(jí)別：CP，98.5%，規(guī)格：25克

HHpC-c 人肝細(xì)胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC2-安基嘌呤(2-8℃) ≥99% 2-cminopurinq 42-06-

H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來源)5-(2-羧基本基)-1-(2-羥基-5-磺基本基)-3-本基甲單鈉鹽，英文名或英文縮寫：Zincon，級(jí)別：BR，0.15%，規(guī)格：250毫克

CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) L-甲狀腺素鈉5克RT

人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38]Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原裝 Roche11583794001
CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 雙嘧達(dá)莫（標(biāo)準(zhǔn)品）Dipyridamole質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞;WPMY-1羧甲司坦（標(biāo)準(zhǔn)品）S-Carboxymethyl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

P388D1細(xì)胞，瘤細(xì)胞 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞,HCT-8細(xì)胞 CM-H020人胰島β細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL硝酸異山梨酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Isosorbide dinitrate質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6月桂氮卓酮;氮酮Laurocapram質(zhì)量規(guī)格：>97%

VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) （標(biāo)準(zhǔn)品）Oxymetazoline 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4-甲氧基酚(>98%,BR)4-Methoxyphenol質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人細(xì)胞;1301對(duì)甲基肉桂酸(>98%,BR)4-Methylcinnamic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞;INS-1 神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞，SK-N-MC細(xì)胞 MPC細(xì)胞，小鼠垂體細(xì)胞4,5-二氟酞腈(>95.0%(GC))4,5-Difluorophthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

HT-29, 人結(jié)腸癌細(xì)胞 Human4-己氧基苯二甲腈(>95.0%(GC))4-Hexyloxyphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 / OX-2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4-羥基鄰苯二甲腈(>97.0%(GC))4-Hydroxyphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，