產(chǎn)品名稱: | polyscience23966-1線性聚乙烯亞胺(MW25,000) |
產(chǎn)品英文名稱: | Polyethylenimine,Linear(PEI) |
CAS號: | 9002-98-6,26913-06-4 |
產(chǎn)品包裝: | 1g |
產(chǎn)品價(jià)格: | |
有效期: | 一年 |
品牌: | Polyscience |
產(chǎn)地: | USA |
保存條件: | |
純度規(guī)格: | 1g |
產(chǎn)品類別: | 轉(zhuǎn)染試劑 |
PEI轉(zhuǎn)染手冊
轉(zhuǎn)染操作流程:
1、細(xì)胞傳代:
轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細(xì)胞至含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行傳代培養(yǎng),接種密度如下:
6孔板:0.5x106細(xì)胞
10cm培養(yǎng)皿:4.0x106細(xì)胞
15cm培養(yǎng)皿:9.0x106細(xì)胞
2、轉(zhuǎn)染
轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。
2.1質(zhì)粒DNA的稀釋
在無菌試管中,用無血清的DMEMW/O酚紅培養(yǎng)基(濃度為10%)稀釋質(zhì)粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
6孔板:200ul+3ug的DNA
10cm培養(yǎng)皿:1ml+7-8ug的DNA
15cm培養(yǎng)皿:2ml+11-12ug的DNA
2.2轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成
將PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
6孔板:9ulPEI復(fù)合體(1ug/ul)=9ug
10cm培養(yǎng)皿:21ulPEI復(fù)合體(1ug/ul)=21ug
15cm培養(yǎng)皿:33ulPEI復(fù)合體(1ug/ul)=33ug
將添加到細(xì)胞的DNA/PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。
4、收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞
轉(zhuǎn)染后48小時內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞/或病毒上清。
試劑的配制:
PEI(1ug/ul)polysciences(CAT#23966-2配制成儲液:)
1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
2、調(diào)整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃
polyscience,inc,成立于1961年,起家于化學(xué)但超越化學(xué)領(lǐng)域的美國制造商,總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓,公司業(yè)務(wù)主要涵蓋三大塊:1.實(shí)驗(yàn)用產(chǎn)品:a)成千上萬種具品牌特色的化合物和試劑,應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究,組織學(xué),電鏡和解剖病理學(xué)以及其他診斷和生命科學(xué)研究;b)種類極其寬廣的單體和聚合體,滿足各方研究領(lǐng)域;c)有機(jī)/無機(jī)化合物,生物可降解材料,磁珠,熒光素,染料和特定抗體,以及常規(guī)蛋白包被顆粒(直徑范圍40nm~10mm)的重要制造工廠;d)頂端多聚化合物的供貨中心,滿足各種高性能工業(yè)領(lǐng)域需求,包括替代能源,汽車電子,國防&航空電子,便攜式通信和計(jì)算機(jī),科研組裝。2.定制合成;3.cgmp生產(chǎn)服務(wù)。