Amplite 比色法甘油-3-磷酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測甘油的試劑盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代謝途徑中的重要中間體。動物，和植物使用G3P產生ATP。 它用于再生腦和骨骼肌細胞中的NAD +。 G3P與肥胖等脂質失衡疾病有關。 Amplite G3P分析試劑盒提供了量化G3P靈敏的方法之一。 該試劑盒使用Amplite Red底物來量化G3P的濃度，其與酶偶聯(lián)反應循環(huán)中形成的過氧化氫的濃度成比例。 該試劑盒是與HTS應用兼容的優(yōu)化“混合和讀取”格式。 如圖1所示，它可在100μL檢測體積內檢測到12.5μMG3P。檢測方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并且易于適應自動化而無需分離步驟。 使用吸光度酶標儀可以在?576 +/- 5 nm處輕松讀取信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質的Amplite 比色法甘油-3-磷酸檢測試劑盒。
樣品實驗方案
簡要概述
1.制備3-磷酸甘油工作溶液（50 µL）
2.加入3-磷酸甘油標準液或測試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時
4.監(jiān)測575 nm OD處的吸光度增加
溶液配制
1.儲存溶液配制
所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 Amplite Red底物儲備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中，制成200X儲備液。 避免暴露在光線下。
1.2 G3P標準溶液（10 mM）：
將250 µL ddH2O加到G3P標準品（組分D）的小瓶中，制成10 mM G3P標準品溶液。
2.標準溶液配制
G3P標準
將100 µL 10 mM G3P標準儲備液添加到900 µL 1X PBS緩沖液中，以生成1000 µM G3P標準溶液。 將200 µL的1000 µM G3P標準溶液加入800 µL的1X PBS緩沖液中，以生成200 µM的G3P標準溶液（CS7），然后進行1：2的系列稀釋，以得到其余的G3P標準液（CS6-CS1）。 注意：稀釋的G3P標準溶液不穩(wěn)定，應在4小時內使用。
3.工作溶液配制
3.1 將5 mL測定緩沖液（組分C）添加到瓶酶混合液（組分B）中，并充分混合。
3.2 將25 µL Amplite Red底物儲備液（200X）加入同一瓶酶混合液（組分B）中，制成G3P工作溶液（終瓶應包含組分A，B和C）。 注意：應立即使用G3P工作溶液，并遠離光線。
