Amplite 熒光法檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測黃*呤的試劑盒，黃*呤是在大多數(shù)人體組織和液體中發(fā)現(xiàn)的嘌呤堿，氨*堿，IBMX，旁黃*呤，己*可*堿，可*堿，它們可以刺激心率，收縮力，高濃度的心律失常。 因此，檢測生物樣品中的黃*呤變化對于疾病診斷和監(jiān)測是重要的。 Amplite 熒光黃*呤測定試劑盒為黃*呤的測量提供了快速且超靈敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式進(jìn)行。 黃*呤在黃*呤氧化酶存在下氧化成尿酸以釋放過氧化氫，其可以通過熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 540nm / 590nm下用Amplite Red特別測量。 使用Amplite 熒光黃*呤測定試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測到低至0.4μM的黃*呤。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供Amplite 熒光法檢測試劑盒 。
樣品實驗方案
簡要概述
1.準(zhǔn)備黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
2.添加黃*呤工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm時讀取熒光強度
溶液配制
1.儲存溶液配制
所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite Red底物儲備液（250X）：
在Amplite Red底物（組分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（組分F）。 注意：Amplite Red底物在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰*乙醇）的存在下不穩(wěn)定。 反應(yīng)中DTT或2-巰*乙醇的終濃度應(yīng)不高于10 µM。 由于Amplite Red在pH> 8.5時不穩(wěn)定，因此應(yīng)在pH 7-8（建議pH 7.4）下進(jìn)行測定。
1.2 HRP儲備溶液（500X）：
將100 µL測定緩沖液（組分B）加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。
1.3 黃*呤氧化酶（XO）儲備溶液（100X）：
向小瓶黃*呤氧化酶（組分E）中加入100 µL測定緩沖液（組分B）制成黃*呤氧化酶（XO）儲備液（100X）。
2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品
將5 µL黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到995 µL測定緩沖液（組分B）中，得到100 µM黃*呤標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取200 µL 100 µM黃*呤標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以得到連續(xù)稀釋的黃*呤標(biāo)準(zhǔn)液（X1-X7）。
3.工作溶液配制
將20μL的Amplite Red底物儲備液（250X），10μL的HRP儲備液（500X）和50μL的黃*呤氧化酶儲備液（100X）加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成總體積 5.08毫升。 注意：避免直接暴露在光線下并立即使用。
