OxiVision Green 過氧化氫（H2O2）檢測探針是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測過氧化氫的熒光探針，盡管H2O2對人類健康和疾病具有重要意義，但由于缺乏可用于活細(xì)胞的敏感和特異性H2O2檢測探針，其產(chǎn)生，積累，運(yùn)輸和功能的分子機(jī)制尚未充分了解。目前可用的H2O2響應(yīng)探針的局限性包括來自其他ROS的干擾背景熒光，對外部活化酶的需要，缺乏水溶性或相容性，和/或紫外區(qū)域中的激發(fā)譜。OxiVision Green 過氧化氫探針無熒光，在可見光區(qū)域無吸收。加入H2O2會引起迅速的熒光增加，伴隨著可見波長吸收帶的增長。由于其二元吸收/發(fā)射響應(yīng)，該探針具有大的動態(tài)范圍。OxiVision Green 過氧化氫探針的熒光響應(yīng)是H2O2選擇性的。與相似的ROS（如O2-，NO或-OCl）相比，OxiVision Green 過氧化氫探針對H2O2的選擇性> 100倍。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的OxiVision Green 過氧化氫（H2O2）檢測探針。 注：該產(chǎn)品溶解需要60分鐘左右。檢測限：30-100μM。

操作步驟

1.準(zhǔn)備OxiVision Green 過氧化氫：

1.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至5 mM OxiVision Green 過氧化氫儲備液。應(yīng)及時使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并冷凍于-20℃.

注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1.2準(zhǔn)備2X OxiVision Green 過氧化氫工作溶液：在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將OxiVision Green 過氧化氫固體溶解在DMSO中，或?qū)⒌确莸脑喝芙庵潦覝?。?0 mM Hepes緩沖液或您選擇的緩沖液（pH 7）中制備濃度范圍為2至20μM的2X工作溶液。建議使用終濃度為5μM的OxiVision Green 過氧化氫測量溶液中H 2O 2濃度。

2.在上清液中運(yùn)行H2 O 2測定：

2.1將50μL的2X OxiVision Green 過氧化氫工作溶液（來自步驟1.2）添加到H 2 O 2標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中，使總 H 2 O 2測定體積為  100μL /好。

注意：對于384孔板中，添加樣品的25μL和25μL 2X OxiVision綠色 過氧化氫工作液到每個孔中。

2.2在室溫下孵育反應(yīng)15至60分鐘，避光。

2.3用Ex / Em = 490 / 525nm 的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測熒光增加。

2.4空白孔中的熒光（僅含測定緩沖液）用作對照，并從具有H 2 O 2反應(yīng)的那些孔的值中減去。

3.在活細(xì)胞中運(yùn)行H2 O 2測定：

OxiVision Green 過氧化氫可被動加載到活細(xì)胞中，并報告細(xì)胞內(nèi)H 2 O 2濃度的微摩爾變化。以下是建議的顯微鏡成像方案，可根據(jù)您的具體研究需要進(jìn)行修改。

3.1所述的OxiVision綠色過氧化氫的工作溶液應(yīng)該作為步驟1.2來制備。

3.2根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.3用 OxiVision Green 過氧化氫工作溶液孵育細(xì)胞5到60分鐘。用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。

3.4使用具有底部讀取模式的熒光酶標(biāo)儀檢測Ex / Em = 490 / 525nm 處的熒光。或者使用FITC通道通過熒光顯微鏡檢查熒光變化。