Amplite 比色超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)超氧化物歧化酶的試劑盒，超氧化物歧化酶（SOD）是一類催化超氧化物歧化成氧和過氧化氫的酶。超氧化物是細(xì)胞中主要的活性氧物質(zhì)之一。它與神經(jīng)退行性疾病，缺血再灌注損傷，動(dòng)脈粥樣硬化和衰老相關(guān)。 SOD是幾乎所有暴露于超氧自由基的細(xì)胞的重要抗氧化防御劑。事實(shí)上，缺乏SOD1的小鼠會(huì)發(fā)展出多種病理，包括肝細(xì)胞癌，加速年齡相關(guān)的肌肉質(zhì)量減少，早期白內(nèi)障發(fā)病率和壽命縮短。 SOD的過表達(dá)保護(hù)小鼠纖維肉瘤細(xì)胞免于凋亡并促進(jìn)細(xì)胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)試劑盒為測(cè)量SOD活性提供了一種快速而靈敏的方法。，NADH和SOD酶系統(tǒng)產(chǎn)生超氧自由基，將WST-1還原成藍(lán)色甲dye染料，其在440nm附近具有吸收。 SOD通過催化超氧陰離子歧化成過氧化氫和分子氧來抑制WST-1的還原，從而降低了甲product產(chǎn)物的440nm吸收。 440nm吸收的減少與SOD活性成比例。該試劑盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Amplite 比色超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
1.準(zhǔn)備并添加SOD標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）
2.添加SOD工作溶液1（25μL）
3.添加SOD工作溶液2（25μL）
4.在室溫下孵育30-60分鐘
5.監(jiān)測(cè)440nm處的吸光度
溶液配制
1.儲(chǔ)備溶液配制
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1SOD標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 kU / mL）：
將50μL測(cè)定緩沖液（組分E）加入到SOD標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備10kU / mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
將10μL10kU / mL SOD標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990μL分析緩沖液（組分E）中，得到100 U / mL SOD標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD1）。 取100 U / mL SOD標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD1），在分析緩沖液（組分E）中進(jìn)行1:10，得到10U / mL SOD標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD2）。 取10 U / mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD2）并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以獲得使用分析緩沖液（組分E）的連續(xù)稀釋的SOD標(biāo)準(zhǔn)品（SD3-SD7）。
3.工作溶液配制
3.1 SOD工作溶液方案1：
將2.5mL測(cè)定緩沖液（組分E）加入WST-1瓶（組分A）中并充分混合。 然后將50μL50XSOD酶溶液（組分B）加入該瓶中以制備SOD工作溶液1.注意：該SOD工作溶液1應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前制備，并避光。 SOD工作溶液1不穩(wěn)定，應(yīng)丟棄未使用的部分。
3.2 SOD工作溶液方案2：
將50μL測(cè)定緩沖液（組分E）加入到NADH小瓶（組分C）中并充分混合。 然后，將50μL的NADH儲(chǔ)備溶液轉(zhuǎn)移到2.5mL測(cè)定緩沖液（組分E）中以制備SOD工作溶液2。
