ReadiUse 去除樣本蛋白試劑盒 氨基酸，離子，代謝物和其他小分子的分析經(jīng)常受生物流體，細(xì)胞和組織裂解物中存在的脂質(zhì)，蛋白質(zhì)和酶的干擾而阻礙。 因此，在生物樣品分析之前，脫蛋白是許多程序中的必要步驟。 AAT Bioquest的脫蛋白樣品制備試劑盒提供了一種快速去除生物樣品中蛋白質(zhì)的方法。 通過應(yīng)用三（TCA）沉淀蛋白質(zhì)。 除去沉淀的蛋白質(zhì)后，用中和溶液中和樣品的pH。 基于TCA的脫蛋白已成功且廣泛用于樣品制備之前，對(duì)小分子（例如糖原，ATP，cAMP，*和抗氧化劑）進(jìn)行定量。 該試劑盒中提供的TCA方法也可用于大規(guī)模去除蛋白質(zhì)。 使用ReadiUse 去除樣本蛋白試劑盒 制備的生物樣品可直接用于各種生化分析。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
1.蛋白質(zhì)沉淀：
1.1均質(zhì)和離心后，制備蛋白濃度小于50 mg / mL的澄清溶液樣品。 將蛋白質(zhì)樣品放在冰上。 注意：高蛋白濃度的樣品可能需要稀釋。
1.2向100 µL蛋白質(zhì)樣品中加入10 µL冷的TCA（組分A）并短暫渦旋混合均勻。
1.3將樣品在冰上放置10分鐘。 以12,000 rpm離心5分鐘。 將上清液（去蛋白樣品）轉(zhuǎn)移到另一個(gè)試管中。 注意：建議中和TCA中的樣品，并立即用于相關(guān)測定。 但是，TCA中的脫蛋白樣品可以在-70°C下保存長達(dá)一個(gè)月。
2.TCA中和：
2.1要中和過量的三氯yi酸，可在收集的上清液中加入10 µL冷中和溶液（組分B），并短暫渦旋混合均勻。
2.2將樣品在冰上放置5分鐘。 現(xiàn)在將樣品脫蛋白并中和。
2.3（可選）讀取280 nm（OD）處的吸光度以檢查樣品是否脫蛋白。
樣品示例
添加TCA和中和溶液（總體積約120 µL）可稀釋原始樣品（初始樣品體積為100 µL）中的蛋白質(zhì)濃度。 稀釋系數(shù)可以通過以下公式計(jì)算：
原始蛋白質(zhì)濃度％=（初始樣品體積）/（初始樣品體積+ TCA體積+中和溶液體積）
| 圖1.基于TCA的蛋白質(zhì)樣品的脫蛋白。 使用ReadiUse TCA脫蛋白測試樣品制備試劑盒（Cat＃19501）對(duì)蛋白濃度低于50 mg / mL的牛血清白蛋白（BSA）樣品和約14.2 mg / mL的兔血清樣品進(jìn)行脫蛋白處理。 用TCA方法去除了所有樣品中超過98％的蛋白質(zhì)。 |
